構建背景：TPO 是調控巨核細胞增殖分化與血小板生成的關鍵細胞因子，該細胞系通過載體介導（如含 CMV 啟動子的表達質粒）將人 TPO 基因導入 CHO 細胞，經嘌呤霉素抗性篩選獲得穩定分泌株，“I" 代表篩選得到的高表達克隆，確保 TPO 產量的均一性。

形態與增殖：體外培養時呈典型上皮樣形態，貼壁生長，細胞呈多邊形，排列緊密，形態與親本 CHO 細胞一致。在 37℃、5% CO?條件下，傳代周期約 2-3 天，可適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基，兼容懸浮培養與無血清體系，高密度培養時（細胞密度達 1×10?個 /mL）仍能保持穩定增殖，為大規模生產 TPO 奠定基礎。

表達特征：TPO 主要分泌至細胞外培養基中，表達量可達 5-10μg/（10?細胞?24h），且長期傳代（＞30 代）后分泌量波動＜15%。分泌的 TPO 為糖基化蛋白，分子量約 70kDa（含糖鏈），與天然人 TPO 的結構與活性高度一致，通過 Western blot 可檢測到特異性條帶，且能被 TPO 抗體中和。

優勢：TPO 分泌穩定，避免重組蛋白表達的批次差異；產物活性高，糖基化修飾與天然 TPO 一致，生物活性（如刺激巨核細胞增殖）是原核表達 TPO 的 3-5 倍；培養適應性強，可通過懸浮培養放大生產，降低大規模制備成本；分泌型表達便于產物純化，無需裂解細胞，簡化下游處理流程。

局限性：長期培養需維持抗生素篩選壓力（如 2μg/mL 嘌呤霉素），否則易丟失表達質粒；TPO 分泌可能受細胞密度影響，需優化培養條件以保持產量穩定；作為異源表達系統，其糖基化模式與人類細胞存在細微差異，雖不影響主要活性，但用于臨床級藥物生產時需進一步驗證。

培養條件：基礎培養基為含 10% 胎牛血清、2μg/mL 嘌呤霉素的 DMEM/F12，添加青mei素 - 鏈mei素防污染。傳代時用 0.25% yi酶消化，貼壁培養融合度控制在 60%-80%，避免過度密集導致 TPO 分泌量下降。懸浮培養可采用含 5% 血清的 CDM4CHO 培養基，通過生物反應器實現規模化生產，TPO 產量可達 20-50mg/L。

TPO 活性檢測：推薦使用巨核細胞增殖實驗驗證活性，如將培養上清與 UT-7/TPO 細胞共孵育 48 小時，通過 CCK-8 法檢測細胞活力，活性單位定義為刺激 50% 最大增殖的上清稀釋倍數，通常比活性＞1×10?U/mg。

凍存與復蘇：凍存液含 10% DMSO、2μg/mL 嘌呤霉素，液氮保存可維持活性 3 年以上；復蘇時 37℃快速解凍，離心后用含篩選壓力的培養基重懸，傳代 2 次后檢測 TPO 分泌量，確保活性穩定。