來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 為親本，通過兩步轉(zhuǎn)染法構(gòu)建：首先通過慢病毒載體導(dǎo)入 IL-4Rα 鏈編碼基因，篩選獲得穩(wěn)定表達(dá) IL-4R 的細(xì)胞株；再通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染將 pGL4.23 載體（含 IL-4 響應(yīng)元件驅(qū)動(dòng)的熒光素酶基因）整合入基因組，經(jīng)嘌呤霉素與 hygromycin 雙篩選獲得陽性克隆。“IL-4R + pGL4.23" 標(biāo)識(shí)其雙重功能 —— 受體表達(dá)與報(bào)告響應(yīng)，構(gòu)建過程中采用 CMV 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng) IL-4R 表達(dá)，確保受體在細(xì)胞表面的穩(wěn)定呈現(xiàn)（流式檢測陽性率＞95%）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長時(shí)細(xì)胞鋪展均勻，較野生型 CHO 略大；懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性較差，主要以貼壁方式培養(yǎng)。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 34-40 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，需同時(shí)添加兩種抗生素（2μg/mL 嘌呤霉素 + 100μg/mL hygromycin）維持雙基因穩(wěn)定整合，傳代 60 次以上受體表達(dá)量與報(bào)告活性波動(dòng)＜8%，凍存復(fù)蘇后存活率超 85%。

功能特征：核心優(yōu)勢在于信號(hào)響應(yīng)的特異性與量化能力：IL-4 刺激后，IL-4R 與 γc 鏈形成異二聚體，激活 JAK1/3-STAT6 通路，使 pGL4.23 載體中的 STAT6 結(jié)合元件驅(qū)動(dòng)熒光素酶表達(dá)，酶活性與 IL-4 濃度呈劑量依賴性（有效范圍 0.1-100ng/mL，EC50=2.3ng/mL）。與天然表達(dá) IL-4R 的細(xì)胞相比，其背景信號(hào)低（未刺激時(shí)熒光素酶活性＜5% 最大響應(yīng)值），信號(hào) - to-noise 比值達(dá) 40:1，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)報(bào)告系統(tǒng)。

貼壁培養(yǎng)操作：

信號(hào)響應(yīng)檢測流程：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO + 雙抗生素）重懸至 5×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上，復(fù)蘇后需培養(yǎng) 2-3 代再進(jìn)行信號(hào)檢測以確保穩(wěn)定性。

優(yōu)勢：IL-4R 表達(dá)穩(wěn)定，信號(hào)響應(yīng)特異性強(qiáng)（對(duì) IL-13 等同源細(xì)胞因子交叉反應(yīng)＜5%）；pGL4.23 報(bào)告系統(tǒng)靈敏度高，檢測下限達(dá) 0.1ng/mL IL-4；雙抗生素篩選確保基因整合穩(wěn)定性；實(shí)驗(yàn)重復(fù)性優(yōu)異（變異系數(shù)＜7%），適合高通量篩選。

局限性：僅反映 IL-4R/STAT6 通路，無法模擬復(fù)雜免疫微環(huán)境中的交叉調(diào)控；貼壁依賴性限制了懸浮高通量篩選；長期傳代可能出現(xiàn)報(bào)告載體沉默（約 5% 克隆 / 60 代），需定期通過熒光素酶活性驗(yàn)證。