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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與馴化:該細胞系源自 CHO-K1 細胞,通過多輪非選擇性傳代與適應性培養獲得:初期以廣譜表達能力為指標,篩選能穩定表達多種外源蛋白(如細胞因子、抗體片段)的克隆;后續經含血清與無血清培養基雙向適應,增強培養模式的靈活性,最終獲得 CHO-E0 株系。“E0" 代表其作為 “基礎型(E)零改造(0)" 細胞的特性,標識其未引入外源基因改造的通用屬性。
形態與增殖:體外培養呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多角形,排列規則;懸浮培養形成直徑 20-60μm 的松散聚集體,細胞圓潤飽滿,活力長期維持在 93% 以上。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 26-32 小時,兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基與多種無血清化學限定培養基,傳代 150 次以上仍保持穩定生長速率,外源蛋白表達量波動<10%,凍存復蘇后存活率超 90%。
表達特征:該細胞系的核心優勢在于廣譜適配性:轉染不同類型表達載體(如質粒、病毒載體)后,重組蛋白表達量可達 2-5g/L(流加培養),尤其對難表達蛋白(如膜蛋白、多亞基復合體)的適配性突出。以 G 蛋白偶聯受體(GPCR)表達為例,其膜定位率達 85% 以上,比普通 CHO-K1 提升 20%,且受體配體結合活性保留率超 90%,為功能研究提供高質量樣本。
基礎研究模型構建
重組蛋白生產
藥物開發工藝優化
貼壁培養操作:
復蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 培養瓶,37℃、5% CO?培養箱靜置培養。
換液:接種 24 小時后更換培養基,去除未貼壁細胞,此后每 48 小時換液一次,維持培養基 pH 7.2-7.4。
傳代:當細胞融合度達 80%-90% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細胞脫落后加入 8mL 培養基終止消化,按 1:5 比例傳代至新培養瓶。
懸浮培養操作:
凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個 /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜,次日轉移至液氮保存,保存期可達 5 年以上。
優勢:遺傳穩定性優異,長期傳代無明顯表型漂移;對不同表達載體兼容性強,無需針對特定蛋白優化細胞系;培養條件寬松,可在含血清與無血清培養基間靈活切換;成本可控,適合大規模基礎研究與工藝開發。
局限性:重組蛋白表達量低于專項改造株(如 CHO-D3b);對部分復雜糖基化蛋白的修飾能力有限;懸浮培養時聚集體大小不均一(10-100μm),需優化攪拌參數。
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