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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與構建:該細胞系以 BHK-21 倉鼠腎細胞為親本,通過脂質體轉染導入含 BQS24 啟動子、目的基因多克隆位點及新mei素抗性基因的表達載體,經 G418 篩選及單克隆純化獲得穩定株。“BQS24" 標識其核心調控元件 ——BQS24 啟動子(一種受病毒感染誘導的順式作用元件),可在病毒復制時啟動下游基因表達,實現 “病毒感應 - 基因激活" 的聯動效應。
形態與增殖:體外培養呈典型成纖維樣形態,貼壁生長,細胞呈長梭形,排列疏松,核質比適中,邊界清晰。在 37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 22-28 小時,適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,傳代 60 次以上仍保持穩定生長速率,BQS24 元件活性無明顯衰減,凍存復蘇后存活率超 85%。
功能特征:該細胞系的核心優勢在于 BQS24 啟動子的病毒響應性:在未感染狀態下,下游基因基礎表達量極低(僅為 CMV 啟動子的 1%-3%);感染水皰性口炎病毒(VSV)、脊髓灰質炎病毒等后,啟動子被快速激活,4-6 小時內報告基因表達量提升 50-100 倍(熒光素酶檢測),且激活強度與病毒滴度呈正相關(線性范圍 102-10? PFU/mL),可作為病毒感染的 “生物傳感器"。
病毒復制機制研究
抗病du藥物篩選
重組蛋白可控表達
貼壁培養操作:
復蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(DMEM+10% 胎牛血清 + 500μg/mL G418)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T25 培養瓶,37℃、5% CO?培養箱靜置培養。
換液:接種 24 小時后首ci換液,去除未貼壁細胞,此后每 48 小時換液一次,維持細胞密度在 30%-70%(避免過度融合影響活性)。
傳代:當細胞融合度達 80% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加入 1mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2 分鐘,鏡檢細胞脫落后加入 5mL 培養基終止消化,1000rpm 離心 5 分鐘,按 1:3 比例傳代至新培養瓶。
病毒誘導實驗處理:
凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 4×10?個 /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜,次日轉移至液氮保存,保存期可達 5 年以上。
優勢:BQS24 元件響應迅速,病毒感染后 4 小時內即可檢測到信號;基因調控動態范圍寬,適合量化分析;貼壁性能優異,可用于長時程共聚焦成像;對多種 DNA 和 RNA 病毒均有響應,適用范圍廣。
局限性:高滴度病毒感染(MOI>5)會導致細胞病變,影響后續實驗;部分病毒(如腺病毒)可能不激活 BQS24 啟動子,需提前驗證適配性;長期傳代可能導致 G418 抗性丟失,需定期篩選陽性克隆。
BHK/BQS24 細胞系的建立為病毒學研究提供了兼具敏感性與可控性的工具,其 “病毒感應 - 基因激活" 特性推動了對病毒復制與宿主響應關系的理解。在基礎研究中,其助力闡明病毒調控宿主基因的分子機制,為發現抗病毒靶點提供線索;在應用領域,其加速了抗病du藥物的篩選與開發進程,尤其對新發突發病毒病的應急研究具有重要價值,同時為重組蛋白的可控表達提供了新型誘導系統,拓展了基因工程細胞的應用場景。
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