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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1348BHK/BQS24倉鼠腎細胞系

BHK/BQS24倉鼠腎細胞系
產品型號:BY-1348
簡要描述:

BHK/BQS24倉鼠腎細胞系,成纖維樣,貼壁生長,含 BQS24 基因元件,可調控特定蛋白表達,適用于病毒學研究、重組蛋白生產及基因功能驗證。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

BHK/BQS24倉鼠腎細胞系
BHK/BQS24倉鼠腎細胞系是經基因工程改造的 BHK 衍生株,通過穩定整合 BQS24 基因調控元件與報告系統,實現特定蛋白的條件性表達,因基因調控精準、病毒敏感性高,成為病毒復制機制研究、重組蛋白可控表達及基因功能驗證的特色模型。其保留 BHK 細胞成纖維樣形態與貼壁生長特性,同時賦予基因表達的時空調控能力,為解析病毒 - 宿主相互作用及蛋白功能提供了可靠工具。
一、細胞來源與基本特性
  • 來源與構建:該細胞系以 BHK-21 倉鼠腎細胞為親本,通過脂質體轉染導入含 BQS24 啟動子、目的基因多克隆位點及新mei素抗性基因的表達載體,經 G418 篩選及單克隆純化獲得穩定株。“BQS24" 標識其核心調控元件 ——BQS24 啟動子(一種受病毒感染誘導的順式作用元件),可在病毒復制時啟動下游基因表達,實現 “病毒感應 - 基因激活" 的聯動效應。

  • 形態與增殖:體外培養呈典型成纖維樣形態,貼壁生長,細胞呈長梭形,排列疏松,核質比適中,邊界清晰。在 37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 22-28 小時,適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,傳代 60 次以上仍保持穩定生長速率,BQS24 元件活性無明顯衰減,凍存復蘇后存活率超 85%。

  • 功能特征:該細胞系的核心優勢在于 BQS24 啟動子的病毒響應性:在未感染狀態下,下游基因基礎表達量極低(僅為 CMV 啟動子的 1%-3%);感染水皰性口炎病毒(VSV)、脊髓灰質炎病毒等后,啟動子被快速激活,4-6 小時內報告基因表達量提升 50-100 倍(熒光素酶檢測),且激活強度與病毒滴度呈正相關(線性范圍 102-10? PFU/mL),可作為病毒感染的 “生物傳感器"。

二、核心應用領域
  1. 病毒復制機制研究

該細胞系是解析病毒激活宿主基因表達的理想模型。通過將病毒復制相關宿主蛋白(如 eIF4E)克隆至 BQS24 下游,可觀察病毒感染時這些蛋白的動態表達,發現 VSV 感染可通過激活 NF-κB 通路增強 BQS24 活性(啟動子熒光素酶活性提升 3 倍),為病毒利用宿主資源的機制提供實驗依據。在 RNA 病毒研究中,其可追蹤病毒復制周期與宿主基因表達的時序關聯,明確病毒非結構蛋白對 BQS24 啟動子的調控效應。
  1. 抗病du藥物篩選

在藥物研發中,該細胞系可用于高通量篩選抑制病毒復制的化合物。通過構建 BQS24-EGFP 報告株,將藥物處理后的感染細胞置于熒光檢測儀中,通過熒光強度變化評估藥物抗病毒活性。例如,在篩選抗 VSV 藥物時,其能快速區分藥物是抑制病毒進入(熒光無變化)還是阻斷復制(熒光減弱),特異性達 90% 以上,且篩選通量適配 96 孔板自動化平臺,大幅縮短候選化合物初篩周期。
  1. 重組蛋白可控表達

利用 BQS24 啟動子的誘導特性,該細胞系可實現重組蛋白的病毒誘導型表達,尤其適合毒性蛋白的生產。將凋亡相關蛋白 Bax 克隆至表達載體后,未誘導時細胞正常增殖,感染低滴度病毒后 Bax 表達量隨時間遞增(24 小時達峰值),凋亡率達 60%-70%,且誘導過程可逆(抗病du藥物處理后表達回落),為毒性蛋白功能研究提供可控系統。
三、培養方法
  • 貼壁培養操作

  1. 復蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(DMEM+10% 胎牛血清 + 500μg/mL G418)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T25 培養瓶,37℃、5% CO?培養箱靜置培養。

  1. 換液:接種 24 小時后首ci換液,去除未貼壁細胞,此后每 48 小時換液一次,維持細胞密度在 30%-70%(避免過度融合影響活性)。

  1. 傳代:當細胞融合度達 80% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加入 1mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2 分鐘,鏡檢細胞脫落后加入 5mL 培養基終止消化,1000rpm 離心 5 分鐘,按 1:3 比例傳代至新培養瓶。

  • 病毒誘導實驗處理

實驗前 12 小時更換無抗性培養基,按 MOI=0.1-1 接種目標病毒,37℃孵育 1 小時后更換新鮮培養基,根據實驗需求在 4-24 小時內檢測基因表達;若需終止誘導,可加入對應抗病du藥物(如利ba韋林)。
  • 凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 4×10?個 /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜,次日轉移至液氮保存,保存期可達 5 年以上。

四、優勢與局限性
  • 優勢:BQS24 元件響應迅速,病毒感染后 4 小時內即可檢測到信號;基因調控動態范圍寬,適合量化分析;貼壁性能優異,可用于長時程共聚焦成像;對多種 DNA 和 RNA 病毒均有響應,適用范圍廣。

  • 局限性:高滴度病毒感染(MOI>5)會導致細胞病變,影響后續實驗;部分病毒(如腺病毒)可能不激活 BQS24 啟動子,需提前驗證適配性;長期傳代可能導致 G418 抗性丟失,需定期篩選陽性克隆。

五、研究意義

BHK/BQS24 細胞系的建立為病毒學研究提供了兼具敏感性與可控性的工具,其 “病毒感應 - 基因激活" 特性推動了對病毒復制與宿主響應關系的理解。在基礎研究中,其助力闡明病毒調控宿主基因的分子機制,為發現抗病毒靶點提供線索;在應用領域,其加速了抗病du藥物的篩選與開發進程,尤其對新發突發病毒病的應急研究具有重要價值,同時為重組蛋白的可控表達提供了新型誘導系統,拓展了基因工程細胞的應用場景。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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