來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 為親本，通過(guò)慢病毒載體介導(dǎo)將人源 CaSR 全長(zhǎng) cDNA 導(dǎo)入細(xì)胞基因組，經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株。CaSR 基因由 CMV 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)，結(jié)合信號(hào)肽優(yōu)化序列，確保受體正確定位于細(xì)胞膜（流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)膜定位率＞90%），名稱中 “CaSR" 直接標(biāo)識(shí)其核心功能蛋白。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形，排列緊密，懸浮培養(yǎng)可形成松散小聚集體（直徑 20-40μm），細(xì)胞輪廓清晰，活力長(zhǎng)期維持在 91% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，傳代 60 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率，CaSR 表達(dá)量無(wú)明顯衰減，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。

功能特征：該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢(shì)在于 CaSR 的鈣濃度響應(yīng)特性：當(dāng) extracellular 鈣離子濃度在 0.5-3.0mM 范圍內(nèi)變化時(shí)，CaSR 可通過(guò) G 蛋白偶聯(lián)途徑激活下游 IP3/Ca2?信號(hào)通路，使胞內(nèi)鈣濃度波動(dòng)幅度達(dá)基礎(chǔ)值的 3-5 倍（熒光探針 Fura-2 檢測(cè)）；其 EC??（半數(shù)有效濃度）為 1.2mM，與人體生理鈣濃度范圍高度匹配，且對(duì) CaSR 激動(dòng)劑（如鍶離子）、拮抗劑（如 NPS-2143）的響應(yīng)符合量效關(guān)系，功能活性接近內(nèi)源性 CaSR。

貼壁培養(yǎng)操作：

功能實(shí)驗(yàn)前處理：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% wan全培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上。

優(yōu)勢(shì)：CaSR 表達(dá)穩(wěn)定，鈣響應(yīng)靈敏度高（濃度變化 0.1mM 即可檢測(cè)到信號(hào)）；功能實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好（批間變異系數(shù)＜8%）；可同時(shí)用于激動(dòng)劑與拮抗劑篩選，應(yīng)用范圍廣；貼壁牢固，適合長(zhǎng)時(shí)程熒光成像實(shí)驗(yàn)。

局限性：作為異源表達(dá)系統(tǒng)，缺乏內(nèi)源性輔助蛋白（如 G 蛋白亞型），部分信號(hào)通路與原代細(xì)胞存在差異；高濃度鈣（＞5mM）會(huì)抑制細(xì)胞增殖，功能實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格控制鈣濃度范圍。