人I型膠原蛋白試劑盒
人I型膠原蛋白試劑盒，多采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）技術(shù)，在科研領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。其主要用于測(cè)定人血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中人 I 型膠原蛋白的含量或活性 。
該試劑盒實(shí)驗(yàn)原理基于雙抗體夾心法。以常見(jiàn)的 ELISA 試劑盒為例，首先用純化的人 I 型膠原蛋白抗體包被微孔板，制成固相抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，往包被單抗的微孔中依次加入樣本（如血清、血漿等），樣本中的人 I 型膠原蛋白會(huì)與固相抗體結(jié)合。之后再加入 HRP 標(biāo)記的相關(guān)抗體，形成抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌步驟去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入底物 TMB 顯色。TMB 在酶的催化下發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色深淺與樣本中人 I 型膠原蛋白的含量呈正相關(guān) 。最后，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，就能計(jì)算出樣品中人 I 型膠原蛋白的濃度 。
從試劑盒的組成來(lái)看，通常包含結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液、洗滌液（常見(jiàn)含 0.05% 吐溫 20 磷酸緩沖鹽水）、酶標(biāo)試劑、顯色劑 A 和 B、終止液以及標(biāo)準(zhǔn)品等。標(biāo)準(zhǔn)品一般會(huì)提供不同濃度梯度，比如 800、400、200、100、50、25 pg/mL，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。
在操作時(shí)，需嚴(yán)格遵循步驟。優(yōu)良行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，按照說(shuō)明書在小試管中準(zhǔn)確操作。加樣環(huán)節(jié)，要分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。標(biāo)準(zhǔn)孔準(zhǔn)確加樣 50μl，待測(cè)樣品孔則先加 40μl 樣品稀釋液，再加 10μl 待測(cè)樣品，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，輕輕晃動(dòng)混勻 。隨后用封板膜封板，置于 37℃溫育 30 分鐘。接著將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用，小心揭掉封板膜，棄去液體、甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次并拍干。之后每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl（空白孔除外），再次洗滌后，每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 10 分鐘，最后每孔加 50μl 終止液終止反應(yīng)，此時(shí)溶液顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色 。在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)，以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度 。
人 I 型膠原蛋白試劑盒保存條件為 2 - 8℃，最佳溫度 6 攝氏度，有效期通常為 6 個(gè)月。使用過(guò)程中有諸多注意事項(xiàng)，如試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫；實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中密封保存；要使用一次性吸頭以免交叉污染；配置洗滌液要用干凈的塑料容器，且使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品等 。憑借其靈敏性高、高效性、吸附均勻良好等特點(diǎn)，人 I 型膠原蛋白試劑盒為科研人員研究人 I 型膠原蛋白在生理和病理過(guò)程中的作用機(jī)制等提供了有力工具 。
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