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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1394MARC145/Gal-10猴胎腎細胞系

MARC145/Gal-10猴胎腎細胞系
產品型號:BY-1394
簡要描述:

MARC145/Gal-10猴胎腎細胞系,MARC145/Gal-10 為表達 Gal-10 的猴胎腎細胞系,上皮樣,貼壁生長,對豬繁殖與呼吸綜合征病毒敏感,支持高效復制,適用于病毒機制研究及相關疫苗研發。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

MARC145/Gal-10猴胎腎細胞系
MARC145/Gal-10猴胎腎細胞系,MARC145/Gal-10 細胞系是在 MARC145 細胞基礎上經基因工程改造的猴胎腎上皮細胞模型,因穩定過表達半乳糖凝集素 - 10(Gal-10)、顯著增強對豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的易感性,成為 PRRSV 機制研究、疫苗研發及抗病du藥物篩選的特色工具。其保留親本細胞的生物學特性,同時通過 Gal-10 的功能優化,為解析病毒與宿主互作提供了精準實驗體系。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與改造機制

MARC145 細胞源自 MA104 細胞的克隆株,而 MARC145/Gal-10 通過慢病毒載體介導,將人源 Gal-10 基因整合至 MARC145 基因組構建而成(“Gal-10" 代表過表達的半乳糖凝集素 - 10)。Gal-10 是一種具有凝集素活性的分泌型蛋白,可通過識別 PRRSV 包膜糖蛋白的糖基化位點與宿主細胞表面糖脂的相互作用,促進病毒內吞過程,使感染效率較親本細胞提升 4-6 倍。
  1. 形態與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態,貼壁生長時呈多邊形,排列緊密如鋪路石狀,胞質內可見散在顆粒,核仁明顯。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,倍增時間約 32-40 小時,傳代比例 1:3 至 1:5,每周換液 2-3 次以維持細胞密度在 2×10?-7×10?個 /cm2。細胞凍存復蘇存活率超 85%,連續傳代 50 次后 Gal-10 表達量無顯著衰減(Western blot 檢測),遺傳穩定性優于瞬時表達系統。
  1. 功能特性

  • Gal-10 表達與定位:Gal-10 主要定位于細胞外基質與細胞膜表面,表達量較親本 MARC145 細胞高 12-18 倍(qPCR 與 ELISA 檢測),培養液中濃度可達 60ng/mL,通過旁分泌效應增強周圍細胞的病毒敏感性。

  • 病毒敏感性:對 PRRSV 的感染效率達 96% 以上(流式細胞術檢測病毒 N 蛋白),感染后 20 小時即可檢測到病毒復制,48 小時病毒滴度達 10?-10? TCID??/mL,較 MARC145 細胞高 1.5-2 個數量級;對 PRRSV 的高致病性毒株(如 HP-PRRSV)敏感性突出,檢出率達 95%,顯著優于其他猴源細胞系。

  • 交叉反應性:對豬圓環病毒 2 型(PCV2)也具有一定敏感性,可支持其低水平復制(滴度 10? TCID??/mL),為 PRRSV 與 PCV2 共感染研究提供模型。

二、核心應用領域
  1. PRRSV 入侵機制研究

  • 病毒吸附與內吞解析:利用 MARC145/Gal-10 的 Gal-10 高表達特性,證實其通過橋接 PRRSV 包膜 GP4 蛋白與宿主細胞表面神經jie苷脂 GM1,促進病毒的網格蛋白介導的內吞作用。通過特異性抗體阻斷 Gal-10 后,病毒內吞率下降 80%,明確其為 PRRSV 入侵的關鍵調節因子。

  • 宿主因子協同作用:該細胞系可用于篩選與 Gal-10 相互作用的宿主蛋白,已鑒定出膜聯蛋白 A2(Annexin A2)作為共受體參與病毒內化,為 PRRSV 感染的多分子調控網絡研究提供新線索。

  1. PRRSV 疫苗研發與優化

  • 高效疫苗株培養:因病毒復制效率高,可縮短 PRRSV 疫苗株的培養周期,較傳統 MARC145 細胞生產工藝提升 40% 產量。例如,在該細胞系中培養的 PRRSV 弱毒疫苗株,病毒滴度穩定在 10?.? TCID??/mL,免疫仔豬后產生的中和抗體效價較常規疫苗高 1 個數量級。

  • 新型疫苗載體評估:可作為重組腺病毒載體表達 PRRSV GP5 蛋白的宿主細胞,表達量達 2.5μg/10?細胞,免疫小鼠后誘導的細胞免疫應答(IFN-γ 分泌)較 MARC145 細胞高 50%,為載體疫苗研發提供高效表達平臺。

  1. 抗病du藥物篩選與機制驗證

  • 靶向 Gal-10 的藥物篩選:基于其特性建立高通量篩選模型,已發現天然產物沒食子酸乙酯可特異性抑制 Gal-10 的凝集素活性,使 PRRSV 感染率下降 85%,EC??=0.8μM,且對細胞毒性低(CC??>60μM),為新型抗病du藥物開發提供先導化合物。

  • 藥物協同效應評估:可用于檢測不同作用機制藥物的協同效果,例如,沒食子酸乙酯與利ba韋林聯合使用時,對 PRRSV 的抑制率達 95%,協同指數(CI)=0.3,證實二者具有顯著協同作用。

三、培養與實驗操作要點
  1. 基礎培養方案

  • 培養基:DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 1mM 丙酮酸鈉提升細胞代謝效率。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 80%-90% 時,棄舊培養基,PBS 洗滌 2 次,加入細胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘至細胞脫落,加入含血清的培養基終止消化,按 1:4 比例接種至新培養瓶,避免細胞密度過高導致 Gal-10 表達降低。

  • 凍存保護:取對數生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 5×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復蘇后傳代 2 次,待 Gal-10 表達穩定后用于實驗。

  1. 病毒感染與檢測

  • PRRSV 接種:細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時至融合度 70%,用無血清培養基稀釋病毒(MOI=0.05),37℃吸附 1 小時,換含 2% 血清的維持液,48 小時后通過 qPCR 檢測病毒 RNA 或間接免疫熒光檢測 N 蛋白,計算病毒滴度。

  • 藥物篩選操作:感染前 2 小時加入待篩藥物,感染后繼續培養 48 小時,通過 CCK-8 檢測細胞活力,同時檢測病毒產量,計算抑制率與選擇指數(SI=CC??/EC??)。

四、優勢與局限性
  • 優勢

  1. PRRSV 敏感性突出:尤其對高致病性毒株的感染效率與復制能力顯著優于同類細胞系,適合烈性 PRRSV 研究。

  1. 功能靶向性強:通過 Gal-10 過表達可特異性解析該分子在病毒感染中的作用,實驗干擾因素少。

  1. 生產效率高:疫苗株培養周期短、產量高,符合工業化生產需求。

  • 局限性

  1. 物種差異影響:猴源 Gal-10 與人、豬源 Gal-10 的同源性分別為 88%、82%,部分研究結果需在豬源細胞中驗證。

  1. 病毒譜較窄:對非 PRRSV 的敏感性提升有限,應用范圍受限于特定病毒研究。

  1. 傳代依賴性:傳代超過 60 代后,Gal-10 表達量下降約 20%,需定期復蘇早期凍存細胞。

五、研究意義與展望
MARC145/Gal-10 細胞系的構建為 PRRSV 研究提供了特異性工具,其對高致病性毒株的高效支持能力,為烈性 PRRSV 的防控研究提供了關鍵模型。在應用層面,其提升了疫苗生產效率與藥物篩選精準度,推動了 PRRSV 防控技術的革新。未來,通過基因編輯技術進一步整合豬源受體分子(如 CD163),有望構建更接近豬體內環境的 “人源化" 細胞模型,加速研究成果向臨床轉化,同時為其他動物病毒的細胞模型構建提供借鑒。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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