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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
靜脈特異性標志物與功能蛋白:高表達靜脈內皮特異性標志物,如 EphB4(陽性率 96%)、血管內皮鈣黏蛋白(VE-cadherin,陽性率 94%),其 EphB4 表達量是 PIEC 細胞的 4 倍,是靜脈表型的關鍵分子;同時表達組織型纖溶酶原激活物(t-PA,陽性率 90%)和血栓調節蛋白(TM,陽性率 88%),抗凝功能活性顯著高于 PIEC 細胞(t-PA 分泌量達 12μg/10?細胞 / 天,是 PIEC 的 2.5 倍),能模擬靜脈內皮的抗凝優勢。
血管生成與屏障功能:在 Matrigel 基質上 48 小時內形成分支較少的管狀結構,管腔直徑較 PIEC 細胞大 30%(模擬靜脈血管特征),血管生成速率雖慢于 PIEC 細胞,但對缺氧的敏感性更高(缺氧條件下 VEGF 分泌量提升 6 倍);體外構建的內皮屏障跨上皮電阻(TEER)值達 150Ω?cm2,通透性高于 PIEC 細胞,符合靜脈內皮的生理特征。
病原體敏感性:對豬圓環病毒 2 型、豬流行性腹瀉病毒等具有高度敏感性,豬圓環病毒 2 型感染后 72 小時出現典型細胞病變(胞質內包涵體、細胞聚集成團),病毒滴度達 10?.? TCID??/mL,且病毒可通過靜脈內皮細胞向周圍組織擴散,模擬病毒在靜脈系統的播散過程。
靜脈疾病機制研究
深靜脈血栓模型:在低血流剪切力(5 dyn/cm2)條件下,ZYM-SVEC01 細胞的血小板內皮細胞黏附分子 1(PECAM-1)表達量下降 40%,凝xue酶生成量增加 3 倍,同時纖維蛋白沉積明顯,模擬深靜脈血栓形成的早期病理變化,其血栓形成相關指標與豬體內模型的一致性達 90%,顯著高于 PIEC 細胞系。
靜脈瓣膜功能研究:通過該細胞系研究靜脈瓣膜內皮細胞的特性,發現瓣膜區細胞的 EphB4 表達量是非瓣膜區的 2 倍,且對剪切力的耐受性更強,為靜脈瓣膜功能不全的機制解析提供關鍵模型。
抗病毒研究與疫苗開發
病毒靜脈嗜性研究:利用其對豬圓環病毒 2 型的敏感性,發現病毒通過結合細胞表面的硫suan軟骨素 A 進入細胞,感染后可使靜脈內皮細胞 t-PA 分泌量下降 60%,抗凝功能受損,揭示病毒導致靜脈血栓的分子機制。
疫苗效力評價:作為豬流行性腹瀉病毒疫苗的效力檢測細胞系,其病毒中和試驗結果與仔豬攻毒保護率一致性達 85%,較 PIEC 細胞提升 10%,被用于評估疫苗對腸道靜脈內皮的保護效果。
藥物研發與安全性評價
抗靜脈血栓藥物篩選:基于其抗凝功能特性建立高通量藥物篩選體系,日均可檢測 150 種化合物。篩選出的新型 t-PA 激活劑可使 ZYM-SVEC01 細胞的纖溶活性提升 2 倍,在動物模型中能顯著溶解已形成的靜脈血栓,為深靜脈血栓治療提供候選藥物。
靜脈毒性評價:用于評估藥物對靜脈內皮的損傷,某靜脈注射hua療藥物在該模型中的半數毒性濃度(TC??)與豬體內靜脈炎發生率的相關性達 88%,顯著高于 PIEC 細胞系,為藥物靜脈毒性早期評價提供可靠工具。
基礎培養方案
培養基:DMEM 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4;為促進靜脈表型維持,可添加 10ng/mL 血管內皮生長因子 C(VEGF-C),使 EphB4 表達量提升 35%。
傳代流程:當細胞融合度達 70% 時,消化處理后按 1:5 比例接種,離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 95%,避免過度融合(>80% 會導致靜脈特異性功能下降)。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 1.5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,接種至預涂纖維連接蛋白的培養瓶,存活率可達 90%。
功能實驗操作
靜脈血管生成檢測:細胞以 4×10?個 / 孔接種至 Matrigel 包被的 24 孔板,培養 48 小時后通過 ImageJ 軟件定量分析管腔直徑與分支數(靜脈血管特征為大管腔、少分支),結果變異系數<10%。
抗凝功能檢測:采用發色底物法測定細胞培養上清中 t-PA 活性,或通過凝xue酶原時間(PT)檢測評估細胞表面抗凝物質的活性,與豬靜脈組織的相關性達 85%。
優勢:
靜脈內皮特異性:是唯yi能穩定模擬豬靜脈內皮功能的細胞系,靜脈標志物表達與抗凝功能顯著優于 PIEC 等動脈內皮細胞系,為靜脈疾病研究提供專屬模型。
疾病模型精準度高:在深靜脈血栓等靜脈疾病模擬中的生理相關性達 90%,遠高于通用內皮細胞系,被國際靜脈學會列為推薦模型。
與動脈細胞系互補:與 PIEC 細胞系形成血管研究的完整體系,可同時模擬動脈與靜脈的差異功能,為血管系統整體研究提供便利。
局限性:
血管類型局限:源自腸系膜靜脈,對大靜脈(如下腔靜脈)功能的模擬有限,需結合不同部位靜脈細胞系使用。
傳代穩定性較差:連續傳代超過 80 代后靜脈特異性標志物表達下降 15%,需嚴格控制傳代次數以保持功能穩定。
培養成本較高:對纖維連接蛋白等細胞外基質依賴性強,培養成本是 PIEC 細胞的 1.3 倍,限制大規模應用。
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