產品系統PRODUCT CENTER
在發展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學的管理促進企業迅速發展技術文章
TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與改造機制
形態與生長特征
功能特性
Slam 表達與定位:Slam 主要定位于細胞膜表面,表達量達 1.2×10?分子 / 細胞(流式細胞術定量),較親本細胞高 20 倍以上,且呈均一性表達(變異系數<8%),為病毒感染提供均一的受體環境。
病毒敏感性:對麻疹病毒的感染效率達 98%(免疫熒光檢測核蛋白 NP),感染后 48 小時病毒滴度達 10?-10? PFU/mL,較 Vero 細胞高 2-3 個數量級;對犬瘟熱病毒、小反芻獸疫病毒等其他副黏病毒也具有廣譜敏感性,滴度提升 1-2 個數量級。
生物安全性:無致瘤性(裸鼠接種實驗陰性),外源病毒與支原體檢測均為陰性,符合人用疫苗生產的細胞基質要求。
麻疹病毒研究與疫苗生產
病毒分離與分型:作為麻疹病毒分離的 “金標準" 改造細胞系,臨床樣本接種后分離效率達 96%,較傳統 Vero 細胞高 40%,可通過蝕斑形態差異區分疫苗株與野毒株(疫苗株蝕斑較小且邊緣規則)。其分離的病毒株經全基因組測序驗證,遺傳一致性達 99.5%,為麻疹病毒基因型監測提供標準化毒株。
減毒活疫苗生產:因病毒產量高且安全性可靠,已用于麻疹減毒活疫苗的工業化生產。在微載體培養系統中,麻疹病毒滴度達 5×10? PFU/mL,單批次 500L 反應器可生產 500 萬劑疫苗,批間差異<5%,疫苗中殘留宿主細胞 DNA<10pg / 劑,符合 WHO 規定的生物制品標準。
其他副黏病毒研究與診斷
跨物種病毒研究:對犬瘟熱病毒(CDV)的敏感性顯著提升,感染后可觀察到典型細胞病變(多核合胞體形成),為 CDV 的跨物種傳播機制研究提供模型。例如,通過比較不同動物源 Slam 受體在該細胞中的表達差異,揭示了 CDV 從犬向熊貓傳播的受體適應性突變。
快速診斷應用:可用于副黏病毒感染的病原學診斷,將臨床樣本接種后 48 小時內通過免疫熒光檢測病毒抗原,診斷符合率達 92%,較傳統 RT-PCR 方法縮短檢測時間 24 小時,為疫情快速響應提供技術支持。
抗病du藥物篩選與機制研究
藥物活性評估:基于其高病毒產量,可構建高通量藥物篩選模型。例如,通過檢測融合抑制劑對麻疹病毒包膜與細胞膜融合的阻斷效果,測定其 EC??=0.8μM,與動物實驗結果一致性達 0.93,為抗麻疹病du藥物研發提供可靠數據。
病毒入侵機制解析:利用該細胞系研究麻疹病毒與 Slam 的相互作用,已鑒定出 Slam 的 D1 結構域是病毒結合的關鍵位點,為靶向受體的抗病du藥物設計提供分子靶點。
基礎培養方案
培養基:DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4,可加入非必需氨基酸提升細胞活力。
傳代流程:當細胞融合度達 80%-90% 時,棄舊培養基,PBS 洗滌 2 次,加入細胞解離液,37℃孵育 3-5 分鐘至細胞脫落,加入含血清的培養基終止消化,按 1:4 比例接種至新培養瓶,避免過度融合導致 Slam 表達下調。
凍存保護:取對數生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 1×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達穩定)。
病毒培養與檢測
麻疹病毒接種:細胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時至融合度 70%,用無血清培養基稀釋病毒(MOI=0.01),37℃吸附 1 小時,換含 2% 血清的維持液,72 小時后通過蝕斑實驗測定病毒滴度,或通過免疫熒光檢測 NP 蛋白評估感染效率。
藥物篩選操作:感染前 1 小時加入待篩藥物,感染后繼續培養 48 小時,通過 CCK-8 檢測細胞活力(排除毒性),同時檢測病毒產量,計算藥物抑制率與選擇指數(SI=CC??/EC??)。
優勢:
病毒敏感性突出:對麻疹病毒等副黏病毒的感染效率與產量顯著優于親本 Vero 細胞,縮短實驗周期并提升數據可靠性。
生物安全性高:保留 Vero 細胞的無致瘤性特征,符合疫苗生產的嚴格標準,應用轉化潛力大。
操作簡便:貼壁生長穩定,傳代與凍存流程成熟,適合標準化實驗室與工業化生產。
局限性:
受體依賴性:僅對依賴 Slam 的病毒有效,對其他受體介導的病毒(如脊髓灰質炎病毒)敏感性無提升,應用范圍受限。
血清依賴度:在無血清培養基中 Slam 表達量下降約 30%,病毒產量降低,增加工業化生產成本。
傳代限制:傳代>80 次后病毒敏感性下降約 25%,需定期復蘇早期凍存細胞。
以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。
產品咨詢
相關產品
型號:BY-1398
型號:BY-1398
型號:BY-1398
型號:BY-1398
Copyright©2025 上海乾思生物科技有限公司 版權所有 備案號:滬ICP備2023041625號-7 sitemap.xml 技術支持:化工儀器網 管理登陸