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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與形態:BHK-21 細胞于 1961 年首ci從 1 日齡敘利亞倉鼠的腎臟組織中分離獲得,經傳代篩選后形成穩定細胞系。體外培養時呈成纖維樣形態,貼壁生長,細胞呈長梭形或星形,排列疏松,具有良好的延展性。在 37℃、5% CO?的恒溫培養環境中,增殖速度快,傳代周期約 1-2 天,可長期傳代且保持穩定活性,同時支持貼壁培養向懸浮培養的馴化,適應規?;a需求。
遺傳特征:該細胞系為永生細胞系,核型呈非整倍體,染色體數目約 44-46 條,核型穩定且無內源性病毒污染。其基因組背景清晰,對外源基因的容納能力較強,轉染后可高效表達目標產物。此外,細胞對多種營養成分的需求簡單,無需復雜的生長因子補充,這一特性使其在基礎研究與工業生產中均易于操作。
病毒培養與疫苗生產
基因表達與重組蛋白研究
病毒學基礎研究
優勢:培養條件簡單,對培養基成分要求低,可適應含血清或無血清培養體系;病毒敏感性高,能支持多種病毒的完整復制周期,且病毒增殖效率遠超其他細胞系;增殖速度快,可通過懸浮培養實現規?;a,滿足工業化需求;細胞遺傳穩定性強,長期傳代后仍保持一致的生物學特性,實驗重復性好,被世界衛生組織(WHO)推薦為疫苗生產的標準細胞系之一。
局限性:作為動物細胞系,其對部分人類病毒(如肝炎病毒)的敏感性較低,應用范圍存在一定限制;長期傳代可能導致細胞形態變異或病毒敏感性下降,需通過定期凍存原始細胞株來維持穩定性;懸浮培養時易出現細胞聚集體,可能影響病毒或蛋白的均一性生產。
培養條件:常規使用含 10% 胎牛血清的 MEM 或 DMEM 培養基,添加青mei素 - 鏈mei素混合液抑制細菌污染。若用于大規模病毒培養,可采用旋轉瓶或生物反應器進行懸浮培養,配合無血清培養基減少外源蛋白干擾,便于后續純化。培養過程中需控制細胞密度(貼壁培養融合度不超過 80%),避免過度密集導致細胞形態改變或增殖停滯。
污染防控:貼壁細胞易受支原體、真菌污染,需定期通過 PCR 或熒光染色法檢測;凍存時需加入 10% 二甲基亞砜(DMSO)作為保護劑,在液氮中可長期保存,復蘇時 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 以減少細胞損傷。
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