NRK49F正常大鼠腎細(xì)胞系（EGF受體陽(yáng)性）
NRK49F正常大鼠腎細(xì)胞系（EGF受體陽(yáng)性）作為源自大鼠腎臟間質(zhì)的成纖維細(xì)胞模型，因保留腎臟成纖維細(xì)胞的典型生物學(xué)特征及活化潛能，在腎臟纖維化機(jī)制研究中具有核心價(jià)值，成為探究腎間質(zhì)纖維化病理過(guò)程及干預(yù)策略的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠正常腎臟皮質(zhì)間質(zhì)組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和永生化處理建立。細(xì)胞形態(tài)在靜息狀態(tài)下呈長(zhǎng)梭形，胞體細(xì)長(zhǎng)，兩端尖細(xì)，細(xì)胞核呈桿狀或橢圓形，核仁不明顯；活化后細(xì)胞體積增大 30%，呈現(xiàn)星狀或多角形，胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著增多。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈平行排列或漩渦狀分布，具有接觸抑制特性，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 96%，顯著高于腎臟上皮細(xì)胞系。核心參數(shù)表現(xiàn)出成纖維細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 48 小時(shí)，連續(xù)傳代 50 次后仍保持正常二倍體核型（染色體數(shù) 42 條）；成纖維細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin）、α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）在靜息狀態(tài)下陽(yáng)性率分別為 98% 和 12%，活化后 α-SMA 陽(yáng)性率升至 85%；膠原蛋白 I（Col I）分泌量達(dá) 23μg/10?細(xì)胞 / 24h，纖維連接蛋白（FN）表達(dá)量是腎小管上皮細(xì)胞的 6.8 倍；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在腎臟纖維化機(jī)制研究中，NRK49F 細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1（TGF-β1）刺激后，48 小時(shí)內(nèi) α-SMA 表達(dá)量增加 5.2 倍，Col I mRNA 水平升高 4.7 倍，細(xì)胞收縮能力增強(qiáng) 3.8 倍，可模擬體內(nèi)腎成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵過(guò)程，為解析纖維化啟動(dòng)機(jī)制提供理想模型。藥物干預(yù)研究方面，該細(xì)胞在姜黃素處理下，TGF-β1 誘導(dǎo)的 Col I 分泌量下降 42%，Smad3 磷酸化水平降低 58%，能很好地反映抗纖維化藥物的干預(yù)效果，助力靶向藥物篩選。在腎損傷微環(huán)境研究領(lǐng)域，該細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，上皮細(xì)胞損傷釋放的細(xì)胞因子可使 NRK49F 活化率提升 35%，而活化的成纖維細(xì)胞會(huì)反過(guò)來(lái)抑制上皮細(xì)胞增殖，形成 “上皮 - 間質(zhì)細(xì)胞交叉對(duì)話" 模型，適用于研究腎損傷后的間質(zhì) - 上皮相互作用。此外，將該細(xì)胞接種于裸鼠腎被膜下，可構(gòu)建腎纖維化動(dòng)物模型，用于評(píng)估候選藥物的體內(nèi)抗纖維hua療效。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：靜息狀態(tài)培養(yǎng)推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱。誘導(dǎo)活化時(shí)采用含 5ng/ml TGF-β1 的培養(yǎng)基，處理時(shí)間通常為 24-72 小時(shí)，活化效率可達(dá) 80% 以上。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，更換時(shí)動(dòng)作輕柔以避免細(xì)胞脫落。傳代時(shí)采用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液處理，37℃孵育 5-8 分鐘，待細(xì)胞邊緣回縮后加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，傳代比例為 1:3-1:5，每 3-4 天傳代一次，維持細(xì)胞融合度在 60%-70% 以保持生物學(xué)活性。凍存液配方為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇細(xì)胞存活率達(dá) 93% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的活化潛能。運(yùn)輸采用 T-25 培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，禁止用于臨床診療相關(guān)研究。
NRK49F 大鼠腎成纖維細(xì)胞系以其穩(wěn)定的活化特性、明確的纖維化標(biāo)志物表達(dá)及易于體外操控的優(yōu)勢(shì)，在腎臟纖維化基礎(chǔ)研究與藥物開(kāi)發(fā)中發(fā)揮著不可替代的作用，為揭示腎間質(zhì)纖維化的分子機(jī)制和開(kāi)發(fā)新型抗纖維hua療法提供了可靠的細(xì)胞平臺(tái)。
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