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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
腎臟特異性標志物與轉運功能:高表達腎上皮細胞特異性標志物,如細胞角蛋白 19(CK19,陽性率 98%)、鈉鉀泵 α1 亞基(Na?/K?-ATPase,陽性率 95%),其 Na?/K?-ATPase 活性達 12μmol Pi/mg 蛋白 /h(顯著高于 PNH/HL-059);能通過腎小管樣結構完成水和電解質轉運,模擬腎臟的重吸收功能,與豬腎皮質組織的功能一致性達 85%。
病毒受體廣譜表達:表達多種豬源病毒受體,如豬瘟病毒受體 CD46(陽性率 92%)、豬圓環病毒受體硫酸乙酰肝素(陽性率 94%),受體譜覆蓋 70% 以上的常見豬源病毒;對 PCV2 的受體結合效率是 PNH/HL-059 的 5 倍,為病毒高效感染提供分子基礎。
病毒復制支持能力:對 PCV2 的感染效率達 97%,病毒滴度可達 10?.? TCID??/mL(顯著高于 PNH/HL-059 的 10?.? TCID??/mL);對豬瘟病毒的復制效率居豬源細胞系前列,48 小時病毒滴度達 10?.? TCID??/mL,且能穩定產生典型空斑,是該病毒空斑實驗的金標準細胞系。
豬源病毒分離與鑒定
臨床樣本檢測:作為豬圓環病毒分離的shou選細胞系,PK-15 從臨床腎臟樣本中的病毒分離率達 93%(PNH/HL-059 僅 55%),且 24 小時內即可觀察到典型細胞病變(胞質內包涵體),我國基層獸醫實驗室廣泛將其用于 PCV2 相關疾病的快速確診。
病毒分型研究:利用其對豬瘟病毒不同亞型的敏感性差異,可通過病毒增殖動力學區分強毒與弱毒株(強毒株滴度是弱毒株的 10 倍),為病毒毒力評估提供直觀依據,該方法被 OIE 納入標準操作程序。
疫苗生產與質量控制
常規疫苗生產:在豬瘟滅活疫苗生產中,PK-15 細胞的病毒產量達 10?.2 TCID??/mL,單位面積產量是 PNH/HL-059 的 2.5 倍,且生產成本降低 40%(無需專用肝細胞培養基);全球 80% 以上的豬瘟疫苗采用該細胞系生產,累計應用超 60 年。
疫苗效力檢測:作為豬圓環病毒疫苗批簽發的標準細胞系,其病毒中和試驗結果與仔豬攻毒保護率一致性達 91%,檢測成本僅為動物實驗的 1/6,且耗時從 28 天縮短至 72 小時,大幅提升疫苗質量控制效率。
腎臟疾病機制研究
病毒致腎損傷模型:通過該細胞系研究 PCV2 對腎臟的損傷機制,發現病毒可誘導腎上皮細胞凋亡(凋亡率達 50%),并抑制 Na?/K?-ATPase 活性(下降 60%),導致水鈉代謝紊亂,與 PCV2 感染仔豬的腎炎病理變化一致性達 90%(PNH/HL-059 模型無法模擬)。
腎毒性藥物篩選:建立基于腎臟轉運功能的藥物毒性評價模型,某抗生素在該模型中顯示腎毒性(Na?/K?-ATPase 活性下降 45%),與仔豬腎臟組織損傷結果的相關性達 88%,顯著優于肝細胞系模型。
基礎培養方案
培養基:MEM 培養基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;低成本培養可使用 5% 新生牛血清替代,細胞活性保持 90% 以上,病毒產量下降不超過 8%,適合工業化生產。
傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,按 1:5 比例接種(高于 PNH/HL-059 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 95%,操作簡便性優于肝細胞系。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 1.5×10?個 /mL,-80℃凍存可保存 6 個月(存活率>90%),液氮保存可達 5 年以上,復蘇后 24 小時即可恢復正常增殖。
病毒培養與檢測操作
豬圓環病毒培養:細胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養 24 小時后接種病毒(MOI=0.01),37℃培養 72 小時,通過實時熒光定量 PCR 檢測病毒拷貝數(可達 10? copies/mL),結果變異系數<5%。
空斑實驗優化:細胞單層接種 6 孔板,病毒 10 倍系列稀釋后吸附 1 小時,覆蓋含 1% 瓊脂糖的維持液,72 小時后結晶紫染色計數空斑,空斑形成單位(PFU)檢測靈敏度達 10?.? PFU/mL。
優勢:
應用普適性強:對多種豬源病毒敏感,無需針對特定病毒進行基因改造,適合基層實驗室的常規檢測與規模化生產,應用范圍遠超 PNH/HL-059 等器官特異性細胞系。
培養成本低廉:對血清質量要求低,可使用低成本替代血清,傳代操作簡單,培養成本僅為肝細胞系的 1/3,尤其適合資源有限的機構。
歷史數據豐富:累計應用超 60 年,積累了海量病毒培養與檢測的標準化數據,實驗結果易與歷史數據比對,是獸醫學研究的 “基準細胞系"。
局限性:
器官功能模擬有限:雖能模擬腎臟基礎功能,但缺乏完整的腎單位結構,無法研究腎小球 - 腎小管協同作用,需與原代腎組織模型配合使用。
部分病毒敏感性低:對豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)的分離率僅 40%(顯著低于 ST 細胞的 90%),需與其他細胞系聯合使用以覆蓋更多病毒類型。
代謝功能較弱:藥物代謝酶表達量低(CYP3A4 活性僅為 PNH/HL-059 的 10%),不適合藥物代謝研究。
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