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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
內皮標志物與功能蛋白:高表達血管內皮特異性標志物,如 CD31(陽性率 98%)、血管性血友病因子(vWF,陽性率 95%),其 vWF 分泌量達 8μg/10?細胞 / 天,顯著高于 MPK 細胞;同時表達血管內皮生長因子受體 2(VEGFR2,陽性率 92%)和凝xue酶原激活物抑制劑 1(PAI-1),具備完整的血管舒張、凝血調節功能,能模擬動脈內皮的生理狀態。
血管生成與屏障功能:在 Matrigel 基質上 24 小時內可形成完整的管狀結構,管腔形成率達 90%(顯著高于其他內皮細胞系),且能響應 VEGF 誘導發生遷移(遷移速率達 25μm / 小時),模擬動脈新生血管形成過程;體外構建的內皮屏障跨上皮電阻(TEER)值達 200Ω?cm2,接近體內動脈內皮的屏障功能。
病原體敏感性:對豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒等具有高度敏感性,豬瘟病毒感染后 48 小時出現典型細胞病變(細胞間隙增大、脫落),病毒滴度達 10? TCID??/mL,且病毒可通過內皮細胞擴散,模擬病毒在體內的血管播散過程。
血管疾病機制研究
動脈粥樣硬化模型:在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導下,PIEC 細胞的細胞間黏附分子 1(ICAM-1)表達量提升 5 倍,單核細胞黏附率增加 4 倍,同時膽gu醇沉積明顯,模擬動脈粥樣硬化的早期病理變化,為解析疾病發生機制提供關鍵模型。
血栓形成機制解析:通過 PIEC 細胞研究凝血系統與內皮細胞的相互作用,發現凝xue酶可使細胞表面 PAI-1 表達提升 3 倍,抑制纖溶系統活性,證實內皮細胞在血栓形成中的調節作用,為抗血栓藥物研發提供靶點。
抗病毒研究與疫苗開發
病毒血管嗜性研究:利用其對豬瘟病毒的敏感性,發現病毒通過結合細胞表面的硫酸乙酰肝素進入細胞,感染后可使內皮細胞屏障通透性增加 60%,揭示豬瘟病毒導致血管出血的分子機制。
疫苗效力評價:作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒疫苗的效力檢測細胞系,其病毒中和試驗結果與仔豬攻毒保護率一致性達 88%,較其他細胞系提升 15%,被多家疫苗企業用于批次質量控制。
藥物研發與安全性評價
抗血管生成藥物篩選:基于其血管生成特性建立高通量藥物篩選體系,日均可檢測 150 種化合物。篩選出的新型抑制劑可使管狀結構形成率下降 70%,VEGFR2 磷酸化水平降低 80%,動物實驗顯示其能抑制動脈新生血管形成,為腫瘤抗血管zhi療提供候選藥物。
血管毒性評價:用于評估藥物對動脈內皮的損傷,某hua療藥物在該模型中的半數毒性濃度(TC??)與豬體內動脈內皮損傷劑量相關性達 85%,顯著高于 MPK 細胞系,為藥物血管毒性早期評價提供可靠工具。
基礎培養方案
培養基:DMEM 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4;為促進血管生成功能,可添加 20ng/mL VEGF,使 VEGFR2 表達量提升 30%。
傳代流程:當細胞融合度達 70% 時,消化處理后按 1:4 比例接種,離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 90%,避免過度融合(>80% 會導致內皮功能下降)。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 1.5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,接種至預涂明膠的培養瓶,存活率可達 85%。
功能實驗操作
血管生成檢測:細胞以 5×10?個 / 孔接種至 Matrigel 包被的 24 孔板,培養 6 小時后開始形成管狀結構,24 小時通過 ImageJ 軟件定量分析管腔長度與分支點數,結果變異系數<10%。
屏障功能檢測:使用 Transwell 小室構建單層內皮屏障,培養 72 小時后通過 Millicell ERS-2 測定 TEER 值,或檢測熒光標記右旋糖酐的通透性,評估屏障完整性。
優勢:
動脈內皮特異性:是唯yi能穩定模擬豬髖動脈內皮功能的細胞系,血管生成與凝血調節功能顯著優于 MPK 等細胞系,為動脈血管疾病研究提供專屬模型。
功能完整性:保留完整的血管內皮生理功能,實驗結果的生理相關性高,被國際血管生物學協會列為推薦細胞系。
病原體研究價值:對多種豬源病毒的敏感性高,能模擬病毒在血管內皮中的感染過程,研究結果的臨床參考價值高。
局限性:
培養要求高:對培養表面(如明膠包被)依賴性強,培養成本是 MPK 細胞的 1.2 倍,不適合大規模生產。
血管類型局限:源自髖動脈,對靜脈內皮功能的模擬有限,需與靜脈內皮細胞系配合使用。
傳代穩定性差:連續傳代超過 100 代后血管生成能力下降 20%,需嚴格控制傳代次數以保持功能穩定。
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