MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞系，成骨特性穩(wěn)定，貼壁生長(zhǎng)，表達(dá) Runx2、ALP 等標(biāo)志物，可礦化，適用于成骨研究及骨疾病藥物篩選。

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MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞系

MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細(xì)胞系源于 C57BL/6 小鼠顱頂前成骨細(xì)胞，是保留完整成骨分化程序的經(jīng)典模型，在成骨細(xì)胞增殖分化、骨基質(zhì)形成及礦化機(jī)制研究中地位關(guān)鍵，因能模擬體內(nèi)成骨全過(guò)程，成為骨代謝及骨疾病藥物篩選的標(biāo)準(zhǔn)工具。

細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或多角形，貼壁生長(zhǎng)呈漩渦狀，長(zhǎng)徑 20-25μm，核橢圓形含 1-2 個(gè)核仁，增殖期核分裂象較多。電鏡下胞質(zhì)富粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，分化后出現(xiàn)基質(zhì)小泡。免疫表型顯示，增殖期高表達(dá) Runx2（90%）和 ALP（85%），分化期上調(diào) OCN（80%）和 ColⅠ（95%），礦化期鈣結(jié)節(jié)富集 OPN，表型變化與體內(nèi)成骨時(shí)序一致。

體外培養(yǎng)以含 10% 胎牛血清的 α-MEM 為基礎(chǔ)，37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期 48 小時(shí)，倍增時(shí)間 36 小時(shí)。誘導(dǎo)條件下（50μg/mL 抗壞血酸、10mM β- 甘油lin酸鈉），經(jīng)歷三階段：增殖期（1-7 天）ALP 升高；分化期（8-14 天）ColⅠ 分泌達(dá) 20μg/mL?24h；礦化期（15-21 天）形成鈣結(jié)節(jié)，鈣含量 150μg/mg 蛋白，覆蓋率超 60%。無(wú)誘導(dǎo)時(shí) ALP 僅為誘導(dǎo)組 20%，連續(xù)傳代 30 次分化能力穩(wěn)定，凍存復(fù)蘇存活率超 95%。

成骨分化受多通路協(xié)同調(diào)控。成骨誘導(dǎo)后，BMP/Smad 通路激活，BMP2 處理 12 小時(shí) Smad1/5/8 磷酸化升 7 倍，Runx2 活性增 5 倍。Wnt/β-catenin 通路同步激活，β-catenin 核轉(zhuǎn)位增 6 倍，協(xié)同上調(diào) ALP 和 ColⅠ。PI3K/Akt 通路中期作用，第 7 天 p-Akt 達(dá)基礎(chǔ) 8 倍，調(diào)控增殖向基質(zhì)合成轉(zhuǎn)換，通路激活有時(shí)序性，為階段調(diào)控研究提供模型。

礦化過(guò)程與體內(nèi)一致，基質(zhì)小泡含高濃度鈣和 ALP，融合后形成羥基磷灰石。茜素紅染色顯示鈣結(jié)節(jié)面積隨時(shí)間線性增加，第 21 天占培養(yǎng)面積 35%。礦化依賴 ColⅠ 網(wǎng)絡(luò)，其抗體處理使結(jié)節(jié)減少 70%，礦化相關(guān)基因表達(dá)量高，具主動(dòng)調(diào)控基礎(chǔ)。

骨代謝研究中，雌激素處理使 ALP 升 40%，礦化結(jié)節(jié)增 50%，依賴 ERα。PTH 間歇促進(jìn)礦化（鈣增 30%），持續(xù)抑制（降 40%）。破骨細(xì)胞條件培養(yǎng)基抑制礦化 60%，上調(diào) RANKL 2 倍，模擬骨重建環(huán)境。

藥物篩選中，BMP2 模擬肽使 ALP 升 60%，礦化結(jié)節(jié)增 80%。阿侖lin酸鈉使鈣含量增 45%，抑制 MMP-13 活性 50%，批間差異小，適合高通量篩選。

骨疾病模型中，地塞mi松處理使 ALP 降 50%，礦化結(jié)節(jié)減 70%，ROS 增 3 倍，NAC 可逆轉(zhuǎn)。高糖抑制礦化 45%，模擬糖尿病骨病，為研究提供工具。

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