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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1458MDCK/IgR犬腎細胞系

MDCK/IgR犬腎細胞系
產(chǎn)品型號:BY-1458
簡要描述:

MDCK/IgR犬腎細胞系為穩(wěn)定表達免疫球蛋白受體的上皮細胞系,貼壁生長,可介導抗體轉運,適用于病毒 - 抗體互作、黏膜免疫及藥物轉運機制研究。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

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  • 質量保障

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詳細介紹

MDCK/IgR犬腎細胞系
MDCK/IgR犬腎細胞系是通過基因工程技術在 MDCK (NBL-2) 野生型細胞基礎上穩(wěn)定表達免疫球蛋白受體(IgR)的工程化上皮細胞系,因具備抗體轉運功能且保留腎臟上皮細胞特征,對病毒 - 抗體復合物的識別與轉運效率顯著提升,成為黏膜免疫機制、病毒中和作用及藥物轉運研究的重要模型。其表達的 IgR 與犬源免疫球蛋白的結合常數(shù)達 4.6×10?1?M,與野生型 MDCK 細胞形成 “基因修飾 - 天然對照" 的研究體系,在病毒中和機制與抗體藥物開發(fā)中具有du特jia值。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與工程化特征

MDCK/IgR 細胞系源自 2010 年研究者通過慢病毒載體將犬 IgR 基因導入 MDCK (NBL-2) 野生型細胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選獲得的穩(wěn)定表達株(“IgR" 代表免疫球蛋白受體)。該細胞系因 IgR 表達穩(wěn)定性達 95% 以上,2012 年被納入國際細胞庫,解決了野生型 MDCK 細胞缺乏功能性 IgR、無法模擬抗體轉運過程的問題,成為首ge能研究抗體跨上皮轉運的犬腎細胞模型。
  1. 形態(tài)與生長特征

細胞呈上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多邊形排列(與野生型 MDCK 的 “鋪路石" 狀相似,但邊緣更清晰),胞質富含與轉運相關的囊泡結構,細胞核呈橢圓形(核質比約 1:4.5,略低于野生型)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基(添加 5μg/mL 嘌呤霉素維持篩選),倍增時間約 26-30 小時(稍長于野生型),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時融合度達 80%(增殖能力略弱于野生型)。連續(xù)傳代 150 次后仍穩(wěn)定表達 IgR(陽性率>90%),核型保持 78 條染色體,功能特性無顯著漂移,適合長期實驗。
  1. 功能特性

  • IgR 表達與抗體結合:膜表面 IgR 表達量達 6.2×10?分子 / 細胞(野生型 MDCK 幾乎不表達),可特異性結合犬 IgG、IgA(結合率分別為 98%、85%),對豬源免疫球蛋白的交叉結合率約 30%;IgR 介導的抗體內吞效率是野生型細胞的 8 倍,轉運至基底側的抗體量達初始濃度的 45%(野生型<5%),模擬黏膜上皮的抗體轉運過程。

  • 病毒 - 抗體復合物處理:對流感病毒 - 抗體復合物的捕獲效率達 90%(野生型為 25%),通過 IgR 介導的內吞作用將復合物轉運至細胞內,其中 80% 被靶向溶酶體降解(野生型多通過非特異性途徑清除),顯著增強抗體的病毒清除能力;與野生型相比,病毒 - 抗體復合物處理后細胞存活率提升 60%。

  • 屏障功能與受體協(xié)同:形成穩(wěn)定的緊密連接,跨上皮電阻(TEER)值達 300-330Ω?cm2(略低于野生型),保留野生型的唾液酸受體表達(SAα2,3/SAα2,6 比例 1:1.1),對流感病毒的感染效率與野生型一致(99%),但在抗體存在時,病毒復制量下降至野生型的 1/20,體現(xiàn) IgR 與病毒受體的功能協(xié)同。

二、核心應用領域
  1. 黏膜免疫與抗體轉運機制研究

  • IgR 介導的抗體轉運路徑:利用該細胞系發(fā)現(xiàn),IgR 通過與抗體 Fc 段結合,啟動網(wǎng)格蛋白介導的內吞(與野生型的非特異性內吞不同),轉運過程依賴 Rab11 陽性 recycling endosome(敲除后轉運效率下降 75%),與犬腸道黏膜的抗體轉運規(guī)律wan全一致(R2=0.93),為口服抗體藥物的設計提供依據(jù)。

  • 母源抗體傳遞模擬:在幼犬被動免疫研究中,MDCK/IgR 細胞可模擬母乳抗體經(jīng)腎臟重吸收過程,IgA 經(jīng) IgR 轉運的效率達 52%,與幼犬血清中母源抗體水平的相關性達 91%(野生型細胞無法模擬),揭示新生動物獲得被動免疫的關鍵機制。

  1. 病毒中和作用與抗體評價

  • 抗病毒抗體效能檢測:建立基于 IgR 的抗體中和實驗模型,某抗流感病毒單克隆抗體在該細胞系中表現(xiàn)出的中和效價是野生型細胞的 3 倍(EC??=0.05μM),更接近動物體內保護效果(相關性達 94%),因 IgR 介導的抗體富集作用,可顯著提升低濃度抗體的檢測靈敏度。

  • 病毒逃逸抗體機制解析:通過對比 MDCK/IgR 與野生型細胞,發(fā)現(xiàn)某流感病毒變異株可通過改變血凝素構象,降低抗體結合能力,同時抑制 IgR 介導的轉運清除(效率下降 60%),雙重機制導致中和逃逸,該發(fā)現(xiàn)為廣譜抗體設計提供靶向位點。

  1. 抗體藥物開發(fā)與轉運研究

  • 口服抗體藥物篩選:利用其抗體轉運功能,篩選出可被 IgR 高效轉運的抗 PEDV 單克隆抗體(轉運效率達 48%),在仔豬口服實驗中,腸道吸收量是普通抗體的 3 倍,對 PEDV 的抑制率達 85%,解決了抗體藥物口服生物利用度低的問題。

  • 藥物 - 抗體偶聯(lián)物遞送:將抗病du藥物與 IgG 偶聯(lián),通過 MDCK/IgR 細胞的轉運系統(tǒng),藥物在基底側的釋放量是游離藥物的 10 倍,對感染細胞的靶向性顯著提升(IC??下降至 0.1μM),減少對正常細胞的毒性。

三、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 功能特異性突出:具備野生型 MDCK 缺乏的 IgR 介導抗體轉運功能,可模擬天然黏膜的抗體處理過程,為免疫機制研究提供專屬模型,彌補野生型細胞在抗體功能研究中的不足。

  1. 檢測靈敏度高:對病毒 - 抗體復合物的捕獲與轉運能力,使抗體中和實驗的靈敏度提升 3-5 倍,尤其適合低親和力抗體的效能評價,結果與在體實驗相關性更高。

  1. 與野生型互補性強:保留野生型的病毒敏感性與屏障功能,可通過對比實驗區(qū)分 IgR 依賴與非依賴的生物學過程,研究設計更具科學性。

  • 局限性

  1. IgR 種屬特異性:主要表達犬源 IgR,對人源或豬源抗體的轉運效率較低(<30%),需構建相應種屬的 IgR 表達細胞系(如 MDCK/pIgR)。

  1. 培養(yǎng)條件復雜:需持續(xù)添加篩選抗生素,長期培養(yǎng)可能影響細胞代謝,功能穩(wěn)定性略低于野生型(傳代 150 次后 IgR 表達下降 10%)。

  1. 功能單一性:僅強化抗體轉運功能,無法模擬其他免疫細胞的協(xié)同作用,需與免疫細胞系聯(lián)合使用。

四、研究意義與展望
MDCK/IgR 細胞系的建立為抗體轉運與病毒中和研究提供了精準工具,其應用使黏膜免疫機制研究的效率提升 40%。未來,通過表達人 - 犬嵌合 IgR,可拓展其在人類抗體藥物研發(fā)中的應用;結合野生型 MDCK 細胞,有望構建 “抗體轉運 - 病毒感染" 雙通道研究平臺。作為基因工程細胞的代表,其與野生型細胞形成的互補體系,共同推動抗病毒抗體開發(fā)與黏膜免疫機制研究的突破。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯(lián)系我們。

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