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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
SV40 大 T 抗原表達:持續高表達 SV40 病毒大 T 抗原(陽性率 100%),該蛋白可與 p53、Rb 等抑癌蛋白結合并使其失活,同時能與含 SV40 復制起點的質粒結合,啟動質粒在細胞內的自主復制,使外源基因拷貝數提升 10-100 倍,表達量可達細胞總蛋白的 10%。
轉染效率:脂質體介導的瞬時轉染效率達 80% 以上,電穿孔轉染效率超 90%,顯著高于同類靈長類細胞系;對多種表達載體兼容,尤其適合含 SV40 啟動子的質粒,轉染后 48-72 小時即可檢測到高豐度外源蛋白。
病毒支持能力:可支持多種 DNA 病毒(如腺病毒、皰疹病毒)的復制,對逆轉錄病毒包裝效率高,可生產滴度達 10? TU/mL 的重組病毒,為基因遞送系統研究提供關鍵工具。
基因功能與蛋白質相互作用研究
瞬時表達平臺:作為外源基因瞬時表達的 “黃金標準",COS-7 細胞被廣泛用于驗證基因編碼產物的功能。例如,通過轉染熒光標記的膜蛋白基因,可在 48 小時內觀察到蛋白在細胞膜上的定位,共聚焦顯微鏡成像分辨率高,背景熒光低,結果重復性達 95%。
蛋白質相互作用篩選:利用其高效表達特性,通過免疫共沉淀(Co-IP)技術研究蛋白質相互作用,可在 1 周內完成從轉染到結果驗證的流程。研究發現,某腫瘤相關蛋白與轉錄因子的結合強度在 COS-7 細胞中與體內實驗一致性達 85%,顯著高于大腸桿菌表達系統。
病毒學研究與疫苗開發
病毒復制機制解析:因表達 SV40 大 T 抗原,可用于研究依賴該蛋白的病毒復制過程,如多瘤病毒的 DNA 復制周期;同時可作為病毒滴度測定的標準細胞系,腺病毒 TCID??檢測的變異系數<5%,結果穩定可靠。
重組疫苗生產:在基因工程疫苗研發中,COS-7 細胞可快速生產病毒樣顆粒(VLPs),如人乳頭瘤病毒(HPV)VLPs 的產量達 50μg/10?細胞,純度超 90%,免疫原性與昆蟲細胞表達系統相當,但生產周期縮短 30%。
重組蛋白生產與藥物篩選
功能蛋白制備:適用于生產需翻譯后修飾的重組蛋白,如糖基化酶、膜受體等。某重組ren干擾素在 COS-7 細胞中的表達量達 200ng/mL,比原核表達系統的活性高 10 倍,且糖基化修飾與天然蛋白一致。
藥物靶點驗證:通過轉染疾病相關突變基因,構建藥物篩選模型。在阿爾茨海默病研究中,轉染突變型 APP 基因的 COS-7 細胞可分泌 Aβ42 肽,篩選出的抑制劑可使 Aβ42 水平下降 60%,動物實驗顯示其能減少腦內斑塊形成。
基礎培養方案
培養基:DMEM 高糖培養基添加 10% 胎牛血清、100U/mL 青mei素、100μg/mL 鏈mei素,pH 維持在 7.2-7.4,無需添加生長因子即可維持良好生長狀態;血清濃度可降至 5% 以減少背景干擾(如用于熒光蛋白觀察)。
傳代流程:當細胞融合度達 80% 時,用 0.25% yi酶 - EDTA 消化 3 分鐘,終止消化后按 1:8 比例接種,離心速度 1200rpm,24 小時貼壁率超 95%,避免過度融合(>90% 會導致細胞形態改變)。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 2×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,直接接種無需離心,存活率可達 90%。
轉染與功能實驗操作
脂質體轉染步驟:細胞以 5×10?個 / 孔接種 6 孔板,培養 24 小時至融合度 60%-70%,將 2μg 質粒與 5μL 脂質體混合,室溫孵育 20 分鐘后加入細胞,6 小時后換液,48 小時檢測表達效率,轉染效率穩定在 80% 左右。
病毒滴度測定:將重組病毒 10 倍梯度稀釋后感染 COS-7 細胞(3×10?個 / 孔,96 孔板),37℃培養 72 小時,通過熒光計數或細胞病變法計算滴度,每稀釋度設 8 復孔以保證結果可靠性。
優勢:
轉染效率卓yue:瞬時轉染效率居靈長類細胞系首wei,且對多種載體兼容,是基因功能研究的shou選模型。
培養簡便:適應多種培養基,傳代操作簡單,成本低于其他永生化靈長類細胞系,適合大規模實驗。
功能穩定性:連續傳代后仍保持高效表達能力,實驗結果重復性高(變異系數<5%),被全球實驗室廣泛驗證。
局限性:
永生化特征:因 SV40 轉化導致細胞增殖異常,可能丟失部分正常腎細胞功能,不適合研究細胞周期調控或抑癌基因功能。
基因組不穩定性:染色體數目異常,可能影響長期實驗的一致性,建議短期(<20 代)內使用。
翻譯后修飾差異:雖然優于原核系統,但與人類細胞的糖基化模式存在細微差異,重組蛋白用于臨床前研究時需謹慎驗證。
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