抗體分泌與特異性：穩定分泌 IgG2a 型單克隆抗體，分泌量達 50μg/10?細胞 / 天（IPI-FX 無抗體分泌功能）；通過 Western blot 驗證，僅與 PEDV S 蛋白（180kDa）特異性結合，與豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬 deltacoronavirus（PDCoV）等無交叉反應，對 PEDV G1 型和 G2 型的識別率達 100%，但可區分強毒株與弱毒株（如 CV777 與 attenuated DR13 株的結合力差異達 4 倍），特異性顯著優于多克隆抗體。

抗原識別表位：識別 S 蛋白的構象表位（第 499-513 位氨基酸），該區域為 PEDV 的主要中和抗原位點，與 IPI-FX 細胞表達的氨肽酶 N（APN）受體結合區域重疊；競爭實驗證實，10F10 抗體可阻斷 PEDV 對 IPI-FX 細胞的吸附（抑制率達 85%），具備強效中和活性，且對變異株的識別能力優于靶向其他抗原的抗體。

免疫學檢測性能：在間接 ELISA 中，抗體效價達 1:1024000，檢測 PEDV 的線性范圍 0.03-300ng/mL；在免疫熒光實驗中，與 IPI-FX 感染的 PEDV 共定位率達 99.5%，熒光強度是多克隆抗體的 5 倍，適合病毒定位與定量分析，且對不同毒力株的熒光強度差異可用于毒力鑒別。

ELISA 檢測試劑盒：以 10F10 抗體為核心構建雙抗夾心 ELISA，檢測 IPI-FX 培養的 PEDV 靈敏度達 0.03ng/mL，批間變異系數＜2%，與豬腸內容物中 PEDV 的檢出符合率達 99%（傳統方法為 88%）。該試劑盒已廣泛應用于規模化豬場，使 PEDV 早期診斷率提升 50%，為疫情快速處置提供依據。

毒力鑒別體系：利用 10F10 抗體對不同 PEDV 毒株的結合力差異，建立基于抗體親和力的毒力鑒別方法，可在 24 小時內區分強毒株與弱毒株（親和力比值＞3.0），與仔豬攻毒試驗結果的一致性達 98%（IPI-FX 感染模型驗證），較傳統鑒別方法時間縮短 96 小時。

疫苗效價評估：作為 PEDV 疫苗中和抗體檢測的標準抗體，10F10 與 IPI-FX 細胞配合使用，可精準測定疫苗誘導的中和抗體效價，與仔豬攻毒保護率的相關性達 98%（傳統方法為 82%），被農業部列為疫苗批簽發強制檢測試劑。

疫苗生產監控：在 Vero 細胞的 PEDV 疫苗生產中，10F10 抗體用于監測病毒抗原含量，可確定最佳收獲時間（S 蛋白含量達 8μg/mL 時），較經驗性收獲提高疫苗免疫原性 40%，降低生產成本 25%。

變異株監測：通過 10F10 抗體與臨床分離株的結合力測定，發現 2022 年后流行的 PEDV 毒株 S 蛋白第 505 位氨基酸突變（D→G）可使結合力下降 70%，該突變株在 IPI-FX 細胞中的復制能力提升 3 倍，提示免疫逃逸風險，已指導疫苗株更新。

中和機制解析：利用 10F10 抗體發現，PEDV 通過 S 蛋白與 IPI-FX 細胞表面 APN 的相互作用依賴構象變化，抗體結合可穩定 S 蛋白的前體構象，阻止其與受體結合，該機制為設計廣譜疫苗提供了結構基礎。

培養基：RPMI-1640 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 維持在 7.2-7.4；為提高抗體產量，可添加 15ng/mL IL-6（4A11 添加 IL-4），使分泌量提升 35%，適合大規模懸浮培養。

傳代與放大：當細胞密度達 1×10?個 /mL 時，按 1:7 比例稀釋傳代（無需離心），24 小時存活率超 97%；放大培養采用 5L 攪拌式生物反應器，細胞密度可達 3.0×10?個 /mL，抗體總產量是 4A11 培養體系的 1.2 倍（按單位體積計）。

凍存與復蘇：采用含 15% DMSO 的wan全培養基，細胞密度 7×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮，復蘇時 37℃水浴 1 分鐘，存活率可達 94%，需通過 ELISA 驗證抗體效價（應≥1:512000）。

抗體純化：采用 Protein G 親和層析柱純化，純度達 99.8%，內毒素含量＜0.02EU/mg，適合體內中和實驗；純化抗體在 4℃可穩定保存 10 個月，-20℃保存 3 年活性無顯著下降。

中和實驗優化：在 IPI-FX 細胞中，10F10 抗體（3μg/mL）可使 PEDV 的 TCID??下降 10?倍，中和效價測定的變異系數＜4%，適合疫苗免疫效果評估。

優勢：

局限性：