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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學(xué)的管理促進企業(yè)迅速發(fā)展首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1408RM-2獼猴腎細胞系
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PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
表型標(biāo)志物表達:高表達腎小管上皮細胞特異性標(biāo)志物,如細胞角蛋白 18(CK18)、鈉 - 葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白 2(SGLT2),免疫熒光陽性率>95%;同時具有活躍的離子轉(zhuǎn)運功能,可通過檢測 Na?/K?-ATP 酶活性(達 110μmol Pi/mg protein/h)評估細胞功能完整性,與原代腎小管上皮細胞水平相當(dāng)。
病毒敏感性:對多種病毒具有廣譜敏感性,尤其對脊髓灰質(zhì)炎病毒、腺病毒、腎綜合征出血熱病毒的感染效率達 90% 以上,48 小時病毒滴度可達 10?-10? TCID??/mL,感染后 24 小時出現(xiàn)典型細胞病變(細胞圓縮、脫落、形成空斑);對部分肝炎病毒也具有一定支持能力,可檢測到相關(guān)病毒抗原分泌,為肝 - 腎綜合征研究提供模型。
腎臟功能模擬:在體外可形成極性單層結(jié)構(gòu),具有一定的尿液濃縮與物質(zhì)重吸收功能,對葡萄糖的重吸收率達 32%(通過放射性同位素標(biāo)記法檢測),能響應(yīng)血管緊張素 Ⅱ 的刺激(細胞內(nèi) Ca2?濃度升高 2 倍),模擬腎臟的生理調(diào)節(jié)過程。
病毒學(xué)研究與疫苗研發(fā)
病毒分離與鑒定:可用于從臨床樣本中分離腎臟嗜性病毒,如腎綜合征出血熱患者尿液樣本接種后,72 小時即可觀察到典型細胞病變,分離效率達 85%,較傳統(tǒng)細胞系縮短 12-24 小時,為疫情快速診斷提供技術(shù)支持。
疫苗生產(chǎn)與評估:因?qū)顾杌屹|(zhì)炎病毒的高敏感性,可用于脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗的生產(chǎn)工藝優(yōu)化。在微載體培養(yǎng)系統(tǒng)中,病毒滴度達 10?.? TCID??/mL,單批次產(chǎn)量較轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)提升 6 倍,疫苗中殘留宿主細胞 DNA<10pg / 劑,符合 WHO 生物制品標(biāo)準。
腎臟疾病機制研究
腎小管損傷模型構(gòu)建:通過特定藥物處理建立藥物性腎損傷模型,RM-2 細胞在一定濃度藥物作用 48 小時后,凋亡率達 38%,同時伴有腎損傷分子 1(KIM-1)表達上調(diào) 7 倍,與人類藥物性腎損傷的分子特征高度一致,為研究腎小管修復(fù)機制提供平臺。
腎臟纖維化研究:在 TGF-β1 刺激下,RM-2 細胞可發(fā)生上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),α- 平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達上調(diào) 5 倍,膠原分泌量增加 3 倍,模擬腎臟纖維化的病理過程,用于篩選抗纖維化藥物。
藥物腎毒性評價與篩選
腎毒性預(yù)測:可用于評估藥物的腎臟安全性,通過檢測細胞活力、乳酸脫氫酶釋放及 KIM-1 分泌,建立藥物腎毒性分級標(biāo)準。例如,某非甾體抗炎藥在一定濃度下即可導(dǎo)致 RM-2 細胞活力下降 50%,與臨床報道的腎毒性劑量一致,預(yù)測準確率達 82%。
腎臟保護藥物篩選:基于藥物損傷模型,篩選具有腎保護作用的化合物。發(fā)現(xiàn)某天然產(chǎn)物衍生物可將藥物誘導(dǎo)的細胞凋亡率從 38% 降至 14%,同時降低活性氧(ROS)水平 28%,動物實驗顯示其可改善藥物導(dǎo)致的腎功能損傷(血肌酐水平下降 38%),為腎保護藥物研發(fā)提供候選分子。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM/Ham's F12(1:1)培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4,可加入 5ng/mL 表皮生長因子(EGF)促進細胞增殖與功能維持。
傳代流程:當(dāng)細胞融合度達 70%-80% 時,棄舊培養(yǎng)基,PBS 洗滌 2 次,加入細胞解離液,37℃孵育 4-5 分鐘至細胞脫落,加入含血清的培養(yǎng)基終止解離,按 1:3 比例接種至新培養(yǎng)瓶,避免過度融合導(dǎo)致細胞極性丟失。
凍存保護:取對數(shù)生長期細胞,用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇時 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后接種,傳代 2 次待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后使用。
病毒培養(yǎng)與功能實驗操作
病毒接種:細胞以 3×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時至融合度 60%,用無血清培養(yǎng)基稀釋病毒(MOI=0.1),37℃吸附 1 小時,換含 2% 血清的維持液,72 小時后通過 TCID??法測定病毒滴度,或通過免疫熒光檢測病毒抗原。
腎毒性檢測:細胞以 5×103 個 / 孔接種 96 孔板,培養(yǎng) 24 小時后加入梯度濃度藥物,繼續(xù)培養(yǎng) 48 小時,通過 CCK-8 法檢測細胞活力,同時收集上清檢測 KIM-1 含量,綜合評估藥物腎毒性。
優(yōu)勢:
靈長類模型優(yōu)勢:與人類腎臟細胞的基因同源性達 94% 以上,生物學(xué)特征高度相似,研究結(jié)果的臨床轉(zhuǎn)化價值顯著高于嚙齒類模型。
功能完整性:保留腎小管上皮細胞的病毒敏感性與腎臟功能特征,可模擬體內(nèi)腎臟的生理與病理過程,適合多領(lǐng)域研究。
應(yīng)用范圍廣:既可用于病毒學(xué)研究與疫苗生產(chǎn),又能支撐腎臟疾病機制探索與藥物篩選,適用場景多樣。
局限性:
來源限制:獼猴為保護動物,細胞系獲取受倫理與資源限制,成本較高。
培養(yǎng)要求高:對培養(yǎng)基成分敏感,無血清培養(yǎng)時細胞活力下降 28%,增加大規(guī)模應(yīng)用難度。
結(jié)構(gòu)單一性:僅模擬腎小管上皮細胞功能,缺乏腎小球、腎間質(zhì)等結(jié)構(gòu),無法wan全復(fù)制腎臟的復(fù)雜微環(huán)境。
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