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來源與永生化:該細胞系源自中國倉鼠成年肺組織,經原代培養與克隆篩選獲得永生化株系,“V79" 命名源自早期克隆編號。原代細胞通過酶解法分離,經 50 代連續傳代篩選出增殖穩定的單克隆,永生化過程未引入外源基因,主要依賴體外培養壓力實現,全基因組測序顯示其與原代肺成纖維細胞遺傳相似度>97%,核型分析證實染色體數目為 2n=22,核型穩定性優于多數成纖維細胞系(傳代 100 次核型畸變率<2%)。
形態與增殖:體外培養呈典型成纖維樣形態,貼壁生長時呈長梭形,胞體細長且胞質伸展明顯,細胞排列呈平行或漩渦狀;懸浮培養易聚集成團,故以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 24-28 小時,較 CHL 細胞更短,適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,傳代 150 次以上生長速率衰減<10%,自發突變率<1×10??,凍存復蘇后存活率超 88%。
功能特征:核心優勢在于低背景突變與高代謝活性:HGPRT(次黃piao呤鳥piao呤磷酸核糖轉移酶)基因自發突變率極低(<5×10??),便于基因突變事件的檢測;Ⅰ 相代謝酶(如 CYP1A1)表達量較 CHL 細胞高 30%,可直接代謝部分前致突變物,無需額外添加代謝活化系統,符合 OECD 476 基因突變測試指南要求。同時,其對輻射損傷響應靈敏,γ 射線照射后 DNA 雙鏈斷裂標志物 γH2AX 焦點形成效率較普通細胞高 25%。
基因突變測試
細胞毒性與代謝研究
輻射生物學效應研究
貼壁培養操作:
復蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉移至含 10mL 預熱培養基(DMEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養,24 小時貼壁率超 90%。
換液:接種 24 小時后首ci換液,去除未貼壁細胞,此后每 2 天換液一次,維持細胞密度在 1×10?-5×10?個 /cm2(密度過高會降低代謝活性)。
傳代:融合度達 70%-80% 時,棄培養基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細胞解離液,37℃孵育 2 分鐘,鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止,按 1:5 比例傳代,避免過度融合導致形態改變。
基因突變測試流程:
細胞準備:對數期細胞以 2×10?個 / 皿接種 100mm 培養皿,培養 24 小時后加入受試物,處理 4-24 小時(依受試物特性調整)。
表達培養:去除受試物,新鮮培養基培養 7-10 天(讓突變表型表達),期間每 3 天換液一次。
突變克隆計數:加入選擇培養基(含 6 - 硫代鳥piao呤 5μg/mL),培養 10-14 天后計數抗性克隆,計算突變頻率(每 10?存活細胞的突變克隆數)。
凍存流程:取對數生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 6×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 5 年,復蘇后傳代 1-2 次即可用于實驗。
優勢:自發突變率低(<1×10??),基因突變檢測準確性高;代謝活性強,可直接代謝多數前致突變物;對輻射與化學誘變劑敏感性高,檢測下限低;傳代穩定性好,150 代內生物學特性無顯著改變;培養周期短,實驗效率優于 CHL 細胞。
局限性:成纖維細胞特性限制其在上皮細胞特異性毒性研究中的應用;部分水溶性極差的受試物需添加助溶劑(可能影響代謝活性);長期傳代(>180 次)可能出現代謝酶活性下降(約 15%),需定期復蘇早期凍存株。
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