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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學的管理促進企業(yè)迅速發(fā)展首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1363CHO-JJ-9中國倉鼠卵巢細胞系
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來源與篩選:該細胞系以 CHO-K1 為親本,通過亞硝ji胍化學誘變結(jié)合表觀遺傳表型篩選獲得。經(jīng)多輪單克隆純化,挑選出第 9 株組蛋白修飾譜改變zui顯著的克隆(“JJ-9" 標識誘變批次與克隆編號)。篩選過程未引入基因編輯,僅通過檢測組蛋白修飾整體水平(如乙酰化、甲基化總含量)確定陽性克隆,全基因組測序顯示與親本相似度>99.5%,確保遺傳背景的穩(wěn)定性。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài),貼壁生長時細胞鋪展均勻,較野生型 CHO 稍大且邊界清晰;因染色質(zhì)功能異常,懸浮培養(yǎng)易聚集成團(直徑 50-100μm),故主要以貼壁方式培養(yǎng)。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 36-42 小時,較野生型延長 6-8 小時,適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基,傳代 60 次以上組蛋白修飾異常表型穩(wěn)定(整體波動<8%),凍存復蘇后存活率超 84%。
功能特征:核心優(yōu)勢在于組蛋白修飾的廣泛性改變:整體組蛋白乙酰化水平較野生型升高 25%,甲基化水平降低 18%,導致全基因組染色質(zhì)開放度顯著變化(ATAC-seq 顯示 18% 的基因組區(qū)域可及性改變),其中增強子區(qū)域開放度差異最tu出(上調(diào)區(qū)域占 12%,下調(diào)區(qū)域占 15%)。ChIP-seq 驗證顯示,多個組蛋白修飾(如 H3K4me3、H3K27ac)的分布模式改變,使涉及細胞代謝、應(yīng)激響應(yīng)的 843 個基因表達量出現(xiàn) 2-5 倍差異,模擬了復雜表觀遺傳擾動下的基因調(diào)控表型。
泛表觀遺傳調(diào)控機制研究
染色質(zhì)整體動態(tài)分析
廣譜表觀遺傳藥物篩選
貼壁培養(yǎng)操作:
復蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預熱培養(yǎng)基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 培養(yǎng)瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
換液:接種 24 小時后首ci換液,去除未貼壁細胞,此后每 48 小時換液一次,維持細胞融合度<70% 以保證表觀遺傳狀態(tài)穩(wěn)定。
傳代:當細胞融合度達 60%-70% 時,棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 細胞解離液,37℃孵育 3-4 分鐘,鏡檢細胞脫落后加入 8mL 培養(yǎng)基終止解離,按 1:4 比例傳代,避免過度密集導致修飾表型漂移。
組蛋白修飾檢測:
蛋白提取:取 5×10?個細胞,用組蛋白提取試劑盒分離純化組蛋白,BCA 法定量后調(diào)整濃度至 1μg/μL。
修飾分析:通過 Western blot 檢測總組蛋白乙酰化、甲基化水平(選用泛特異性抗體),或采用質(zhì)譜分析定量多種修飾類型,建議每 15 代檢測一次以驗證表型穩(wěn)定性。
凍存流程:取對數(shù)生長期細胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個 /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮保存,保存期可達 5 年以上,復蘇后需傳代 2-3 次再進行表觀遺傳相關(guān)實驗(確保修飾狀態(tài)穩(wěn)定)。
優(yōu)勢:組蛋白修飾改變范圍廣,可模擬復雜表觀遺傳擾動;表型穩(wěn)定,傳代 60 次整體修飾水平波動<8%;無外源基因整合,保留天然表觀遺傳互作網(wǎng)絡(luò);適合多靶點藥物篩選,檢測效率較單一修飾模型提升 40%。
局限性:修飾改變的復雜性使單一調(diào)控機制解析難度增加(需結(jié)合單修飾模型驗證);貼壁依賴性強,懸浮培養(yǎng)會導致修飾譜改變(約 12%);部分實驗需配套多組學數(shù)據(jù)分析,技術(shù)門檻較高。
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型號:BY-1363
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