GGA-EH家雞胚胎心臟細胞系
GGA-EH家雞胚胎心臟細胞系作為針對家雞胚胎心臟組織的特異性細胞模型,在禽類胚胎心臟發育機制、心肌功能調控及心臟疾病研究領域具有重要價值。它的建立為深入探究家雞胚胎心肌細胞的分化規律、心臟節律維持機制以及胚胎期心臟相關疾病的發生路徑等提供了穩定的體外研究平臺,對禽類心臟疾病防控和胚胎心臟生物學研究意義重大。
家雞胚胎心臟發育是一個復雜且精密的過程,其心臟作為最早形成并發揮功能的器官之一,對胚胎的存活和發育至關重要。心臟的正常發育涉及心肌細胞的增殖、分化、遷移以及心臟結構的逐步形成,任何環節出現異常都可能導致先天性心臟病等嚴重問題。傳統的整體胚胎研究難以細致觀察心肌細胞的動態變化和分子調控機制,而原代心臟細胞培養存在傳代受限、穩定性不足等問題。因此,建立 GGA-EH 家雞胚胎心臟細胞系,成為解析禽類胚胎心臟發育奧秘、推動禽類心臟疾病研究的重要突破口。
GGA-EH 家雞胚胎心臟細胞系的建立經過了嚴謹規范的操作流程。選取孵化至 6-8 日齡的健康雞胚,在超凈工作臺中無菌取出胚胎心臟組織,去除心bao膜和周圍結締組織。將心臟組zhi剪碎成 1mm3 左右的小塊,用含雙抗(青mei素與鏈mei素)的磷酸鹽緩沖液反復沖洗,以清除血液和雜質。加入 0.125% 胰dan白酶 - EDTA 混合液,在 37℃條件下消化 15-20 分鐘,期間每隔 5 分鐘輕輕吹打一次使細胞分散。收集細胞懸液,經 70μm 細胞濾網過濾后,1000r/min 離心 5 分鐘,棄上清,用含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養液重懸細胞,接種于明膠包被的培養瓶中,置于 37℃、5% CO?恒溫培養箱中進行原代培養。培養初期,每 24 小時更換一次培養液,待細胞匯合度達 75% 時進行傳代,目前該細胞系已穩定傳代至 45 代以上,細胞活力保持在 85% 以上。
該細胞系呈現典型的心肌樣形態,部分細胞呈短梭形或多邊形,排列較為密集,胞質豐富且有光澤,細胞核呈圓形或橢圓形,部分細胞可形成肌管樣結構,具有一定的貼壁生長能力。生長特性研究顯示,GGA-EH 細胞在 DMEM/F12 培養液中生長狀態最佳,相較于單純 DMEM 培養液,細胞增殖速度提高約 18%;最適培養溫度為 37℃,與雞胚心臟發育的生理溫度相符;當胎牛血清濃度為 15% 時,細胞群體倍增時間最短,約為 52 小時。傳代至 35 代后,細胞形態和增殖速率無明顯變化,核型分析表明其染色體數目穩定(保持家雞正常的 78 條染色體),遺傳背景可靠,仍保留心肌細胞的特性。
在功能特性方面,GGA-EH 家雞胚胎心臟細胞系展現出豐富的心肌細胞功能。免疫熒光檢測發現,細胞高表達心肌細胞特異性標志物如肌球蛋白重鏈(MHC)、心肌肌鈣蛋白 I(cTnI),證實其心肌細胞屬性。該細胞系具有自主節律性搏動能力,在體外培養條件下可觀察到細胞同步收縮現象,搏動頻率約為 60-80 次 / 分鐘,這對研究心臟節律的產生和調控機制具有重要意義。同時,GGA-EH 細胞在受到缺氧、缺血等刺激時,會表現出心肌細胞te有的應激反應,如乳酸脫氫酶釋放增加、心肌酶活性變化等,為研究心臟損傷的病理機制提供了理想模型。此外,該細胞系對禽類常見的心臟相關病毒(如禽腺病毒)表現出一定的敏感性,感染后會影響細胞的搏動功能,為研究病毒與心肌細胞的相互作用提供了良好材料。
GGA-EH 家雞胚胎心臟細胞系在多個研究領域應用廣泛。在心臟發育研究中,通過對該細胞系進行基因沉默實驗,揭示了 Nkx2.5 基因在心肌細胞分化中的關鍵調控作用;在藥物研發方面,利用該細胞系評估了多種藥物對心肌細胞功能的影響,為篩選心臟保護藥物提供了依據;在疾病模型研究中,建立了基于該細胞系的心肌損傷模型,用于探究先天性心臟病的發病機制。
作為穩定可靠的家雞胚胎心臟細胞模型,GGA-EH 不僅填bu了禽類胚胎心臟細胞長期體外培養的空白,更為禽類心臟發育生物學和心臟疾病研究提供了重要工具,推動了家雞胚胎期心臟疾病防控技術的發展,對提升禽類養殖產業的健康水平和經濟效益具有重要意義。
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