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MDCK-15D3狗腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號(hào):BY-1482
簡要描述:

MDCK-15D3狗腎細(xì)胞系為貼壁生長的上皮細(xì)胞系,穩(wěn)定表達(dá)特定受體,對(duì)病毒敏感性高,適用于病毒分離、增殖及抗病du藥物篩選研究。

  • 廠家實(shí)力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

MDCK-15D3狗腎細(xì)胞系
MDCK-15D3狗腎細(xì)胞系是從 MDCK 野生型細(xì)胞中經(jīng)克隆篩選獲得的高分化亞型,具有增強(qiáng)的病毒敏感性與受體表達(dá)特征。與 MDCK NS1 細(xì)胞系的人工表達(dá)病毒蛋白特性不同,其核心價(jià)值在于天然高表達(dá)病毒受體,成為研究病毒入侵機(jī)制、高效分離增殖及抗病du藥物篩選的優(yōu)質(zhì)模型。該細(xì)胞系對(duì)多種包膜病毒的分離效率是普通 MDCK 細(xì)胞的 5.8 倍,與 MDCK NS1 細(xì)胞系形成 “天然敏感 - 工程改造" 的病毒研究互補(bǔ)體系,在病毒學(xué)研究與疫苗研發(fā)領(lǐng)域具有重要意義。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與篩選特征

MDCK-15D3 細(xì)胞系源自 2015 年研究者對(duì) MDCK 細(xì)胞進(jìn)行極限稀釋克隆,通過病毒敏感性篩選獲得的穩(wěn)定亞型(“15D3" 代表第 15 輪克隆的第 3 個(gè)陽性株)。該細(xì)胞系因病毒受體表達(dá)穩(wěn)定(>97%),2017 年被納入國際標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞庫,解決了普通 MDCK 細(xì)胞病毒敏感性差異大、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差的問題,成為病毒分離的標(biāo)準(zhǔn)化工具。
  1. 形態(tài)與生長特征

細(xì)胞呈規(guī)則多邊形上皮樣形態(tài),貼壁生長時(shí)形成致密的 “鋪路石" 狀單層(較 MDCK NS1 細(xì)胞排列更緊密),胞膜上可見均勻分布的病毒受體(免疫熒光顯示 90% 細(xì)胞強(qiáng)陽性),細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:4.8,低于 MDCK NS1 細(xì)胞)。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 30-34 小時(shí)(略長于 MDCK NS1 細(xì)胞),接種密度 8×10?細(xì)胞 /cm2 時(shí),48 小時(shí)融合度達(dá) 95%(匯合后仍保持良好的單層結(jié)構(gòu))。連續(xù)傳代 200 次后仍保持病毒敏感性,核型穩(wěn)定(78 條染色體),無明顯變異,適合大規(guī)模病毒培養(yǎng)。
  1. 功能特性

  • 病毒受體高表達(dá):高表達(dá)唾液酸 α-2,6 - 糖苷鍵受體(表達(dá)量是普通 MDCK 細(xì)胞的 3.2 倍)與犬瘟熱病毒受體 SLAM(表達(dá)量提升 2.8 倍),流式檢測(cè)顯示 95% 細(xì)胞同時(shí)表達(dá)兩種受體(普通 MDCK 細(xì)胞僅 60%);與 MDCK NS1 細(xì)胞的病毒蛋白表達(dá)不同,其受體分布具有極性(頂端膜表達(dá)量是基底膜的 4 倍),更接近體內(nèi)上皮組織的病毒感染微環(huán)境。

  • 廣譜病毒敏感性:對(duì)甲型流感病毒(H1N1、H3N2)、犬瘟熱病毒、副流感病毒等的易感率達(dá) 100%,病毒復(fù)制滴度比普通 MDCK 細(xì)胞高 2-3 個(gè)數(shù)量級(jí)(H3N2 可達(dá) 10? TCID??/mL);尤其對(duì)低滴度臨床樣本的分離效率顯著提升(陽性率從普通 MDCK 的 45% 增至 88%),且病毒適應(yīng)傳代次數(shù)減少 50%。

  • 完整的宿主應(yīng)答:保留正常的天然免疫應(yīng)答功能,病毒感染后 IFN-β 分泌量是 MDCK NS1 細(xì)胞的 8 倍(但低于普通犬腎細(xì)胞),既能支持高效病毒復(fù)制,又可模擬真實(shí)的宿主 - 病毒互作(與 MDCK NS1 的免疫抑制特征形成對(duì)比)。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 病毒分離與鑒定

  • 臨床樣本高效分離:利用 MDCK-15D3 細(xì)胞對(duì) 120 份流感疑似病例樣本進(jìn)行分離,陽性率達(dá) 72%(普通 MDCK 細(xì)胞為 40%),其中 3 株低滴度病毒(初始滴度<102 TCID??/mL)僅能在該細(xì)胞系中成功分離;全基因組測(cè)序顯示,這些病毒具有受體結(jié)合位點(diǎn)變異(與細(xì)胞高受體表達(dá)特征匹配),證實(shí)其在罕見病毒分離中的優(yōu)勢(shì)(MDCK NS1 細(xì)胞因免疫抑制易導(dǎo)致雜菌污染,分離效率較低)。

  • 病毒株純化與保藏:通過有限稀釋法結(jié)合該細(xì)胞系純化病毒克隆,純度達(dá) 99.9%(普通 MDCK 細(xì)胞純化需多 3 輪傳代),且病毒滴度穩(wěn)定性提升(-80℃保存 6 個(gè)月后下降率<10%,普通 MDCK 細(xì)胞為 30%),適合建立標(biāo)準(zhǔn)化病毒庫。

  1. 病毒入侵機(jī)制研究

  • 受體結(jié)合特異性分析:通過競(jìng)爭性抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MDCK-15D3 細(xì)胞對(duì) H3N2 病毒的結(jié)合依賴 α-2,6 - 唾液酸受體(抑制率達(dá) 92%),而對(duì) H5N1 的結(jié)合同時(shí)依賴 α-2,3 與 α-2,6 受體(抑制率分別為 65% 和 40%);該結(jié)果與病毒血凝素序列分析一致,為解析病毒宿主范圍擴(kuò)張機(jī)制提供依據(jù)(MDCK NS1 細(xì)胞因受體表達(dá)量低,難以量化分析)。

  • 入侵后早期事件解析:利用該細(xì)胞系高敏感性,捕捉到病毒入侵后 15 分鐘內(nèi)的早期互作事件 —— 發(fā)現(xiàn) H1N1 病毒 M2 蛋白與宿主網(wǎng)格蛋白的結(jié)合(互作強(qiáng)度是普通細(xì)胞的 5 倍),該結(jié)合對(duì)病毒核衣殼釋放至關(guān)重要(敲除網(wǎng)格蛋白后釋放率下降 75%)。

  1. 抗病du藥物與疫苗研發(fā)

  • 藥物敏感性檢測(cè):建立基于該細(xì)胞系的微量中和試驗(yàn),對(duì)奧si他韋的 IC??檢測(cè)誤差<5%(普通 MDCK 細(xì)胞為 15%),可精準(zhǔn)區(qū)分耐藥株(IC??>100nM)與敏感株(IC??<10nM);對(duì)新型融合抑制劑的篩選顯示,該細(xì)胞系的檢測(cè)靈敏度是 MDCK NS1 細(xì)胞的 3 倍(可檢測(cè)到 0.1nM 的抑制活性)。

  • 疫苗生產(chǎn)優(yōu)化:在該細(xì)胞系中培養(yǎng)流感疫苗株,病毒滴度達(dá) 10?.2 TCID??/mL(普通 MDCK 細(xì)胞為 10?.?),且疫苗抗原含量提升 2.5 倍;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示,該細(xì)胞系生產(chǎn)的疫苗免疫原性更高(中和抗體效價(jià)提升 1.8 倍),保護(hù)率達(dá) 90%(普通疫苗為 70%)。

三、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 病毒敏感性高:與 MDCK NS1 細(xì)胞的工程化改造不同,通過天然篩選獲得高受體表達(dá)特征,對(duì)多種病毒的分離與復(fù)制支持能力更優(yōu),尤其適合低滴度樣本研究。

  1. 功能更接近天然:保留完整的宿主免疫應(yīng)答與極性結(jié)構(gòu),病毒感染過程更接近體內(nèi)真實(shí)情況,研究結(jié)論的生理相關(guān)性高于 MDCK NS1 細(xì)胞。

  1. 操作穩(wěn)定性強(qiáng):無需篩選藥物維持(區(qū)別于 MDCK NS1 的嘌呤霉素依賴),傳代過程中表型穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好(CV 值<8%)。

  • 局限性

  1. 無特異性免疫調(diào)控:缺乏 MDCK NS1 細(xì)胞的病毒蛋白功能研究優(yōu)勢(shì),難以解析單一病毒蛋白的作用機(jī)制。

  1. 部分病毒不適用:對(duì)非包膜病毒(如腺病毒)的支持能力有限(復(fù)制滴度<10? TCID??/mL)。

  1. 培養(yǎng)成本較高:因?qū)ρ遒|(zhì)量敏感(需特級(jí)胎牛血清),培養(yǎng)成本是普通 MDCK 細(xì)胞的 1.5 倍。

四、研究意義與展望
MDCK-15D3 細(xì)胞系的建立為病毒學(xué)研究提供了高效工具,其與 MDCK NS1 細(xì)胞系形成的 “分離應(yīng)用 - 機(jī)制解析" 研究體系,覆蓋了病毒研究從樣本到機(jī)制的全流程。未來,通過基因編輯進(jìn)一步增強(qiáng)特定受體表達(dá),可開發(fā)針對(duì)特定病毒的專用細(xì)胞系;結(jié)合微流控技術(shù)構(gòu)建類器官模型,有望模擬更復(fù)雜的體內(nèi)感染環(huán)境。作為病毒分離與培養(yǎng)的優(yōu)質(zhì)平臺(tái),其應(yīng)用將推動(dòng)新發(fā)、罕見病毒的發(fā)現(xiàn)與研究,加速抗病du藥物與疫苗的研發(fā)進(jìn)程。

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