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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學的管理促進企業(yè)迅速發(fā)展首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-14728C7抗犬MMP13雜交瘤細胞株細胞系
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PRODUCT CLASSIFICATION技術文章
TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與制備特征
形態(tài)與生長特征
功能特性
抗體分泌與特異性:分泌的單克隆抗體為 IgG1 亞型,效價達 1:10?(ELISA 檢測),與犬 MMP13 的結(jié)合常數(shù)(Kd)為 3.2×10??M(高親和力);Western blot 顯示僅識別犬 MMP13(分子量約 54kDa),與其他犬 MMP 家族成員(如 MMP1、MMP2)無交叉反應(交叉率<0.1%),與 Super Tube 表達的腎小管蛋白無結(jié)合,體現(xiàn)嚴格的抗原特異性。
抗原表位識別:通過肽段掃描確定其識別的表位為犬 MMP13 的 Pro 肽區(qū)(第 45-62 位氨基酸),該區(qū)域為犬 MMP13 te有(與其他物種同源性<50%),故不與人類、小鼠 MMP13 交叉反應(物種特異性);該表位在 MMP13 活化過程中會被剪切,因此 8C7 抗體可特異性識別未活化的酶原形式(與識別活化形式的抗體形成互補)。
抗體功能活性:可通過 ELISA、免疫組化、流式細胞術等多種方法檢測犬 MMP13,在夾心 ELISA 中zui低檢測限達 0.5ng/mL(靈敏度高);在體外實驗中,該抗體可抑制犬 MMP13 的膠原酶活性(抑制率達 72%,IC??=0.8μg/mL),但不影響其他基質(zhì)金屬蛋白酶的活性,體現(xiàn)功能阻斷作用。
犬 MMP13 的生物學功能研究
MMP13 在骨關節(jié)炎中的作用:利用 8C7 抗體檢測發(fā)現(xiàn),犬骨關節(jié)炎模型的關節(jié)滑液中 MMP13 水平是正常犬的 4.8 倍(ELISA 定量),免疫組化顯示 MMP13 主要定位于軟骨細胞(陽性率 65%);通過抗體阻斷實驗,在體外軟骨培養(yǎng)中添加 8C7 抗體可使 Ⅱ 型膠原降解減少 58%(與 Super Tube 的腎小管功能研究形成不同疾病模型的應用對比),證實 MMP13 在軟骨降解中的關鍵作用。
組織特異性表達譜分析:通過 Western blot 與免疫組化結(jié)合 8C7 抗體,繪制犬正常組織中 MMP13 的表達圖譜 —— 在關節(jié)軟骨、皮膚、肺臟中低表達,在妊娠期子宮中高表達(是正常子宮的 3.2 倍),提示其在組織重塑中的生理作用;該結(jié)果為理解 MMP13 的組織功能多樣性提供了基礎數(shù)據(jù)。
犬相關疾病的診斷與機制研究
骨關節(jié)炎的診斷標志物驗證:建立基于 8C7 抗體的 ELISA 檢測方法,對 120 例臨床犬的關節(jié)滑液樣本分析顯示,MMP13 水平與骨關節(jié)炎嚴重程度呈正相關(R2=0.78),診斷靈敏度達 85%、特異性達 90%(優(yōu)于傳統(tǒng)炎癥指標);縱向監(jiān)測顯示,患病犬經(jīng)治療后 MMP13 水平下降與臨床癥狀改善同步(相關系數(shù) 0.82),證實其作為療效評估指標的價值。
腫瘤侵襲機制解析:在犬骨肉瘤模型中,8C7 抗體檢測發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中 MMP13 表達量是正常骨組織的 7.5 倍,且與腫瘤轉(zhuǎn)移呈正相關(轉(zhuǎn)移組陽性率 92% vs 非轉(zhuǎn)移組 45%);通過免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn) MMP13 可與整合素 β1 相互作用(促進腫瘤細胞侵襲),而 8C7 抗體可阻斷該相互作用(侵襲抑制率 60%),揭示 MMP13 在腫瘤轉(zhuǎn)移中的分子機制。
抗 MMP13 藥物開發(fā)與評價
藥物篩選模型建立:利用 8C7 抗體的阻斷活性,建立基于細胞的高通量篩選模型,篩選可抑制 MMP13 活性的化合物;某天然產(chǎn)物在該模型中顯示 IC??=1.2μM,且與 8C7 抗體聯(lián)用可使抑制率提升至 90%(協(xié)同效應),為藥物開發(fā)提供候選分子。
治療性抗體評估:通過基因工程改造 8C7 抗體(如人源化、Fc 段優(yōu)化),在犬骨關節(jié)炎模型中顯示,每周注射改造抗體可使關節(jié)軟骨損傷面積減少 65%,Ⅱ 型膠原含量增加 2.3 倍,且無明顯免疫原性(與 Super Tube 用于腎臟藥物評估形成不同靶點的應用案例),顯示其作為治療性抗體的潛力。
優(yōu)勢:
特異性強:與 Super Tube 的器官功能特異性不同,8C7 細胞分泌的抗體對犬 MMP13 具有嚴格的抗原與物種特異性,避免交叉反應干擾,是研究犬 MMP13 的金標準工具。
功能多樣性:既可用于 MMP13 的定性檢測(如免疫組化),也可用于定量分析(如 ELISA),還能通過阻斷活性研究其功能,比普通檢測試劑提供更豐富的研究維度。
應用范圍廣:覆蓋基礎研究(功能機制)、臨床診斷(疾病標志物)、藥物開發(fā)(篩選與評價)等多個領域,與 Super Tube 等細胞系形成不同研究方向的互補。
局限性:
識別表位單一:僅識別 MMP13 的酶原形式,無法檢測活化形式,研究 MMP13 的活化過程需與其他抗體聯(lián)用(增加實驗成本)。
培養(yǎng)成本較高:需添加 HT 添加劑維持生長,大規(guī)模培養(yǎng)時抗體產(chǎn)量受細胞密度影響(高密度時分泌量下降 15%),生產(chǎn)成本高于多克隆抗體。
物種限制:不識別其他物種 MMP13,跨物種研究需重新制備對應物種的雜交瘤細胞系(如人源 MMP13 需另建模型)。
8C7 抗犬 MMP13 雜交瘤細胞系的建立為犬 MMP13 研究提供了關鍵抗體工具,其與 Super Tube 細胞系形成的 “功能蛋白 - 檢測工具" 體系,推動了犬腎臟疾病與骨關節(jié)炎等不同領域的機制研究。未來,通過抗體工程技術改造 8C7 抗體(如雙特異性抗體、抗體藥物偶聯(lián)物),可拓展其在靶向治療中的應用;結(jié)合 CRISPR-Cas9 技術構(gòu)建 MMP13 敲除模型,可進一步驗證其在疾病中的因果作用。作為特異性識別犬 MMP13 的細胞工具,其應用將持續(xù)推動犬相關疾病的研究與防治水平提升。
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