NS1 表達(dá)與分泌：NS1 蛋白在細(xì)胞內(nèi)呈胞質(zhì)分布，同時(shí)可分泌至細(xì)胞外，培養(yǎng)液中 NS1 濃度達(dá) 2-3μg/mL（ELISA 檢測），顯著高于 WNV 感染的 Vero 細(xì)胞（＜0.5μg/mL）。分泌型 NS1 保留天然構(gòu)象，可與抗 NS1 特異性抗體結(jié)合，免疫熒光檢測顯示 95% 以上的細(xì)胞呈 NS1 陽性，表達(dá)均一性高（變異系數(shù)＜7%）。

生物安全性：無致瘤性（裸鼠接種實(shí)驗(yàn)陰性），外源病毒與支原體檢測均為陰性，未整合 WNV 其他病毒基因，避免了潛在的病毒傳播風(fēng)險(xiǎn)，符合人用診斷試劑生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)要求。

病毒敏感性：保留對 WNV 的易感性，感染后病毒滴度達(dá) 10?-10? PFU/mL，與親本 Vero 細(xì)胞相當(dāng)，可用于 WNV 復(fù)制與 NS1 功能的協(xié)同研究。

抗原制備：VERO/WNV-NS1 分泌的 NS1 蛋白可作為診斷抗原，用于 WNV 感染的血清學(xué)檢測。通過親和層析純化的重組 NS1 純度達(dá) 95% 以上，用其制備的 ELISA 試劑盒檢測 WNV 陽性血清的敏感性達(dá) 97%，特異性＞99%，較傳統(tǒng)病毒感染制備的抗原批間差異降低 60%，且避免了病毒培養(yǎng)的生物安全風(fēng)險(xiǎn)（無需 BSL-3 實(shí)驗(yàn)室操作）。

快速診斷試紙條生產(chǎn)：以該細(xì)胞系來源的 NS1 為捕獲抗原，構(gòu)建膠體金免疫層析試紙條，檢測時(shí)間僅需 15 分鐘，對 WNV 感染患者血清的檢出率達(dá) 94%，適合基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)與野外疫情監(jiān)測使用。

疫苗免疫原性檢測：可用于 WNV 疫苗誘導(dǎo)的抗 NS1 抗體檢測。例如，對 WNV 滅活疫苗免疫的小鼠血清，通過 VERO/WNV-NS1 細(xì)胞的間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)，可定量分析抗 NS1 抗體效價(jià)，與中和抗體效價(jià)相關(guān)性達(dá) 0.85，為疫苗免疫效果評估提供補(bǔ)充指標(biāo)（傳統(tǒng)疫苗評估主要依賴中和抗體檢測）。

NS1 亞單位疫苗研究：其分泌的 NS1 蛋白經(jīng)純化后可作為亞單位疫苗候選抗原，免疫小鼠后誘導(dǎo)的抗 NS1 IgG 效價(jià)達(dá) 1:6400，可顯著降低 WNV 感染后的病毒載量（降低 100 倍以上），為開發(fā)無病毒顆粒的安全疫苗提供新思路。

中和抗體篩選：基于其穩(wěn)定表達(dá) NS1 的特性，可構(gòu)建抗 NS1 抗體的高通量篩選模型。例如，通過噬菌體展示文庫篩選獲得的抗 NS1 單克隆抗體，在該細(xì)胞系中驗(yàn)證顯示可抑制 NS1 的胞外分泌（抑制率達(dá) 80%），進(jìn)而降低 WNV 的傳播效率（體外實(shí)驗(yàn)中病毒擴(kuò)散減少 60%）。

NS1 功能研究：利用該細(xì)胞系可解析 NS1 在 WNV 感染中的作用，如通過 CRISPR-Cas9 敲除內(nèi)源性 NS1 表達(dá)后，發(fā)現(xiàn) WNV 復(fù)制效率下降 50%，證實(shí) NS1 對病毒復(fù)制的促進(jìn)作用，為靶向 NS1 的抗病du藥物設(shè)計(jì)提供理論依據(jù)。

培養(yǎng)基：DMEM 高糖培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 維持在 7.2-7.4，可加入青mei素 - 鏈mei素混合液（100U/mL）預(yù)防污染。

傳代流程：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時(shí)，棄去舊培養(yǎng)基，PBS 洗滌 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液，37℃孵育 3-5 分鐘至細(xì)胞脫落，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，按 1:4 比例接種至新培養(yǎng)瓶，避免過度融合導(dǎo)致 NS1 表達(dá)下調(diào)。

凍存保護(hù)：取對數(shù)生長期細(xì)胞，用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基重懸至密度 1×10?個(gè) /mL，分裝后經(jīng)程序降溫盒 - 80℃過夜，轉(zhuǎn)移至液氮長期保存，復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO 后接種，傳代 2 次待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后用于實(shí)驗(yàn)。

蛋白純化：收集培養(yǎng) 48 小時(shí)的細(xì)胞上清，經(jīng) 0.22μm 濾膜過濾后，使用 Ni2?親和層析柱（NS1 含 6×His 標(biāo)簽）純化，洗脫液經(jīng)透析去除咪唑，BCA 法測定蛋白濃度，SDS-PAGE 驗(yàn)證純度。

表達(dá)檢測：通過 Western blot 檢測 NS1（分子量約 48kDa），或 ELISA 定量分析培養(yǎng)液中 NS1 濃度，確保每批次抗原活性一致（批間差異＜10%）。

優(yōu)勢：

局限性：