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LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞系
產(chǎn)品型號:BY-1379
簡要描述:

LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞系,上皮樣,貼壁生長,對麻疹、腮腺炎等副黏病毒敏感,支持病毒高效復(fù)制,適用于病毒分離、疫苗生產(chǎn)及抗病du藥物篩選。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細(xì)介紹

LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞系
LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞系,LLC-MK2 細(xì)胞系是恒河猴腎上皮細(xì)胞的經(jīng)典克隆株,因?qū)β檎畈《尽⑷傺撞《镜雀别げ《究撇《揪哂懈叨让舾行裕夷苤С植《就暾麖?fù)制周期,成為副黏病毒分離鑒定、疫苗生產(chǎn)及抗病du藥物研發(fā)的核心模型。其保留腎上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征,同時因副黏病毒受體的特異性表達(dá),為副黏病毒學(xué)研究提供了專屬實驗體系。
一、細(xì)胞來源與基本特性
  • 來源與克隆背景:該細(xì)胞系源自 20 世紀(jì) 50 年代分離的恒河猴腎原代細(xì)胞,通過有限稀釋法獲得單克隆株(“LLC" 代表原始分離實驗室代號)。篩選過程以副黏病毒敏感性為核心指標(biāo),未引入外源基因,全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 42(恒河猴正常核型),與原代腎上皮細(xì)胞遺傳相似度>96%,核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率<3%,群體均一性優(yōu)于早期混合株(流式檢測細(xì)胞周期同步率偏差<6%)。

  • 形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多邊形,胞質(zhì)豐富,細(xì)胞排列緊密呈鋪路石狀;懸浮培養(yǎng)易脫落死亡,故以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 32-36 小時,適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,傳代 80 次以上生長速率衰減<12%,凍存復(fù)蘇后存活率超 85%,無血清馴化后細(xì)胞密度可達(dá) 3×10?個 /cm2。

  • 功能特征:核心優(yōu)勢在于副黏病毒受體高表達(dá)與復(fù)制支持能力:麻疹病毒受體 CD46 表達(dá)量較普通猴腎細(xì)胞高 4 倍(免疫熒光檢測),腮腺炎病毒受體 SLAM(CD150)陽性率>95%(流式檢測)。感染麻疹病毒后 72 小時,病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL,較 Vero 細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級;感染腮腺炎病毒后 60 小時,細(xì)胞病變(CPE)率達(dá) 90%,表現(xiàn)為多核巨細(xì)胞形成,顯著特征性優(yōu)于其他細(xì)胞系。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 副黏病毒分離與鑒定

該細(xì)胞系是麻疹、腮腺炎病毒分離的 “shou選工具",臨床樣本接種后可通過特征性 CPE 快速鑒定病毒。咽shi子樣本接種后,麻疹病毒分離效率達(dá) 94%,較 B95a 細(xì)胞縮短 24 小時,且能通過多核巨細(xì)胞形態(tài)與免疫熒光快速區(qū)分野毒株與疫苗株。在腮腺炎病毒分離中,其檢出率較 Vero E6 細(xì)胞高 35%,可檢測出低至 5 TCID??的病毒載量,為呼吸道傳染病的病原學(xué)診斷提供關(guān)鍵依據(jù),是 WHO 推薦的麻疹病毒分離標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系。
  1. 副黏病毒疫苗研發(fā)與生產(chǎn)

因符合 WHO 生物制品生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn),LLC-MK2 廣泛用于麻疹、腮腺炎減毒活疫苗的生產(chǎn)。在微載體培養(yǎng)體系中,麻疹病毒滴度可達(dá) 5×10? TCID??/mL,單批次 1000L 反應(yīng)器可生產(chǎn) 800 萬劑疫苗,抗原效價(CIU / 劑)較傳統(tǒng)雞胚工藝提升 50%。其無血清馴化株可降低外源因子污染風(fēng)險,疫苗中宿主細(xì)胞 DNA 殘留量<10pg / 劑,符合國際疫苗安全標(biāo)準(zhǔn)。在工藝優(yōu)化中,通過調(diào)控培養(yǎng)基中谷an酸濃度(0.8-1.0mM),可使病毒收獲時間提前 8 小時,顯著提升生產(chǎn)效率。
  1. 抗病du藥物篩選與評價

該細(xì)胞系為副黏病du藥物研發(fā)提供可靠模型。在抗麻疹病du藥物篩選中,通過病毒滴度測定可精準(zhǔn)測定藥物 EC??(如融合抑制劑 EC??為 1.2μM),結(jié)果與動物實驗相關(guān)性達(dá) 0.86。在腮腺炎病du藥物測試中,其可通過多核巨細(xì)胞計數(shù)量化藥物抑制效果,檢測誤差<5%。基于其建立的 96 孔板高通量篩選體系,日均可檢測 300 種化合物,為副黏病毒應(yīng)急藥物研發(fā)提供快速評估工具。
三、培養(yǎng)方法
  • 貼壁培養(yǎng)操作

  1. 復(fù)蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基(MEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng),24 小時貼壁率超 90%。

  1. 換液:接種 48 小時后首ci換液,去除代謝廢物,此后每 3 天換液一次,維持細(xì)胞密度在 2×10?-7×10?個 /cm2(密度過高會降低副黏病毒敏感性)。

  1. 傳代:融合度達(dá) 80% 時,棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細(xì)胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細(xì)胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止,按 1:4 比例傳代,避免過度融合導(dǎo)致受體表達(dá)下調(diào)。

  • 病毒培養(yǎng)流程

  1. 接種準(zhǔn)備:將細(xì)胞以 1.2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時至融合度 70%-80%,接種前用無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。

  1. 病毒感染:加入 100μL 系列稀釋的副黏病毒液(如麻疹病毒懸液),37℃吸附 1.5 小時,期間每 20 分鐘輕搖一次,吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。

  1. 觀察與收獲:麻疹病毒感染后 60-72 小時觀察 CPE,待 80% 細(xì)胞出現(xiàn)多核巨細(xì)胞時收獲上清,-80℃凍存,通過 TCID??法或 RT-PCR 測定病毒滴度。

  • 凍存流程:取對數(shù)生長期細(xì)胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 6×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 5 年,復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達(dá)穩(wěn)定)。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢:對副黏病毒(尤其麻疹、腮腺炎病毒)敏感性ji高(滴度較普通猴腎細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級);遺傳背景穩(wěn)定,實驗重復(fù)性好(CV<7%);符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn),無內(nèi)源性病毒污染;病毒 CPE 特征典型,易于觀察鑒定;可適應(yīng)無血清培養(yǎng),便于工業(yè)化生產(chǎn)。

  • 局限性:對腸道病毒、冠狀病毒敏感性較低;貼壁依賴性強,懸浮培養(yǎng)難度大;長期傳代(>100 次)可能出現(xiàn) CD46 受體表達(dá)下調(diào)(約 15%);缺乏干擾素合成能力,可能影響藥物體內(nèi)外活性相關(guān)性。

五、研究意義
LLC-MK2 細(xì)胞系的應(yīng)用為*麻疹、腮腺炎等傳染病的防控提供了關(guān)鍵技術(shù)支撐,其高效分離能力使麻疹病毒檢測靈敏度提升 45%,直接助力*消除麻疹行動(WHO 數(shù)據(jù)顯示發(fā)病率下降 98%)。在基礎(chǔ)研究中,其揭示了副黏病毒與受體(如 CD46)的相互作用機制;在公共衛(wèi)生領(lǐng)域,其支撐了數(shù)十億劑聯(lián)合疫苗(MMR)的生產(chǎn),是副黏病毒疫苗產(chǎn)業(yè)的核心細(xì)胞模型,為呼吸道病毒相關(guān)疾病的防控搭建了基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵橋梁。

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