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在發(fā)展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學(xué)的管理促進(jìn)企業(yè)迅速發(fā)展首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-1379LLC-MK2恒河猴腎細(xì)胞系
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Manufacturer Strength有效保修
Valid Warranty質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES詳細(xì)介紹
來源與克隆背景:該細(xì)胞系源自 20 世紀(jì) 50 年代分離的恒河猴腎原代細(xì)胞,通過有限稀釋法獲得單克隆株(“LLC" 代表原始分離實驗室代號)。篩選過程以副黏病毒敏感性為核心指標(biāo),未引入外源基因,全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 42(恒河猴正常核型),與原代腎上皮細(xì)胞遺傳相似度>96%,核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率<3%,群體均一性優(yōu)于早期混合株(流式檢測細(xì)胞周期同步率偏差<6%)。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多邊形,胞質(zhì)豐富,細(xì)胞排列緊密呈鋪路石狀;懸浮培養(yǎng)易脫落死亡,故以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 32-36 小時,適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,傳代 80 次以上生長速率衰減<12%,凍存復(fù)蘇后存活率超 85%,無血清馴化后細(xì)胞密度可達(dá) 3×10?個 /cm2。
功能特征:核心優(yōu)勢在于副黏病毒受體高表達(dá)與復(fù)制支持能力:麻疹病毒受體 CD46 表達(dá)量較普通猴腎細(xì)胞高 4 倍(免疫熒光檢測),腮腺炎病毒受體 SLAM(CD150)陽性率>95%(流式檢測)。感染麻疹病毒后 72 小時,病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL,較 Vero 細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級;感染腮腺炎病毒后 60 小時,細(xì)胞病變(CPE)率達(dá) 90%,表現(xiàn)為多核巨細(xì)胞形成,顯著特征性優(yōu)于其他細(xì)胞系。
副黏病毒分離與鑒定
副黏病毒疫苗研發(fā)與生產(chǎn)
抗病du藥物篩選與評價
貼壁培養(yǎng)操作:
復(fù)蘇:凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基(MEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng),24 小時貼壁率超 90%。
換液:接種 48 小時后首ci換液,去除代謝廢物,此后每 3 天換液一次,維持細(xì)胞密度在 2×10?-7×10?個 /cm2(密度過高會降低副黏病毒敏感性)。
傳代:融合度達(dá) 80% 時,棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細(xì)胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細(xì)胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止,按 1:4 比例傳代,避免過度融合導(dǎo)致受體表達(dá)下調(diào)。
病毒培養(yǎng)流程:
接種準(zhǔn)備:將細(xì)胞以 1.2×10?個 / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時至融合度 70%-80%,接種前用無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。
病毒感染:加入 100μL 系列稀釋的副黏病毒液(如麻疹病毒懸液),37℃吸附 1.5 小時,期間每 20 分鐘輕搖一次,吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。
觀察與收獲:麻疹病毒感染后 60-72 小時觀察 CPE,待 80% 細(xì)胞出現(xiàn)多核巨細(xì)胞時收獲上清,-80℃凍存,通過 TCID??法或 RT-PCR 測定病毒滴度。
凍存流程:取對數(shù)生長期細(xì)胞,1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 6×10?個 /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮,保存期超 5 年,復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗(確保受體表達(dá)穩(wěn)定)。
優(yōu)勢:對副黏病毒(尤其麻疹、腮腺炎病毒)敏感性ji高(滴度較普通猴腎細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級);遺傳背景穩(wěn)定,實驗重復(fù)性好(CV<7%);符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn),無內(nèi)源性病毒污染;病毒 CPE 特征典型,易于觀察鑒定;可適應(yīng)無血清培養(yǎng),便于工業(yè)化生產(chǎn)。
局限性:對腸道病毒、冠狀病毒敏感性較低;貼壁依賴性強,懸浮培養(yǎng)難度大;長期傳代(>100 次)可能出現(xiàn) CD46 受體表達(dá)下調(diào)(約 15%);缺乏干擾素合成能力,可能影響藥物體內(nèi)外活性相關(guān)性。
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型號:BY-1379
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