FRhK-4恒河猴胚腎細胞系

產品型號：BY-1383

簡要描述：

FRhK-4恒河猴胚腎細胞系，上皮樣，貼壁生長，對脊髓灰質炎病毒、登革病毒等敏感，支持高效復制，適用于病毒分離、疫苗研發及抗病du藥物篩選。

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FRhK-4恒河猴胚腎細胞系

FRhK-4恒河猴胚腎細胞系，FRhK-4 細胞系是源自恒河猴胚胎腎臟組織的永生化上皮細胞模型，因對脊髓灰質炎病毒、登革病毒等多種 RNA 病毒具有高度敏感性，且能支持病毒完整復制周期，成為腸道病毒與蟲媒病毒研究、疫苗生產及抗病du藥物篩選的重要工具。其保留胚胎腎細胞的高增殖活性與病毒受體多樣性，為多類病毒的體外研究提供了天然兼容的實驗環境。

一、細胞來源與基本特性

來源與分化特征：該細胞系源自 20 世紀 60 年代分離的恒河猴胚胎腎組織，通過原代培養自然永生化獲得（“FRhK" 代表恒河猴胚腎，“4" 為克隆編號）。未引入外源轉化基因，全基因組測序顯示其染色體數目為 42（恒河猴正常核型），與原代胚腎細胞遺傳相似度＞97%，核型穩定性在傳代 100 次內畸變率＜3%，胚胎期特異性標志物（如 WT1）表達陽性率達 85%（免疫組化檢測）。

形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，貼壁生長時呈多邊形，胞質豐富，細胞排列疏松；懸浮培養可短期存活（72 小時內），但以貼壁培養為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-28 小時，較成年猴腎細胞短 15%-20%，適應含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基，傳代 80 次以上生長速率衰減＜12%，凍存復蘇后存活率超 88%，無血清馴化后細胞密度可達 5×10?個 /cm2。

功能特征：核心優勢在于病毒受體廣譜表達與復制支持能力：脊髓灰質炎病毒受體（PVR）與登革病毒受體（DC-SIGN）共表達陽性率＞90%（流式檢測），對脊髓灰質炎病毒 Ⅰ 型的感染效率達 95%，48 小時病毒滴度可達 10?-10? PFU/mL；感染登革病毒 2 型后 72 小時，細胞病變（CPE）表現為細胞圓縮、網格狀脫落，病毒滴度達 10? TCID??/mL，顯著高于 Vero 細胞（高 1-2 個數量級）。

二、核心應用領域

腸道病毒與蟲媒病毒分離鑒定

該細胞系是脊髓灰質炎病毒分離的 “國際標準模型"，WHO 推薦用于*脊髓灰質炎監測網絡的病毒分離工作。糞便樣本接種后，脊髓灰質炎病毒分離效率達 98%，較 RD 細胞縮短 12 小時，且能通過 CPE 形態差異區分不同血清型（Ⅰ 型病變更迅速）。在登革病毒分離中，其對 4 種血清型的檢出率均＞85%，可檢測出臨床樣本中低至 5 PFU 的病毒載量，為熱帶傳染病的病原學診斷提供關鍵依據，是東南亞地區登革熱監測的shou選細胞模型。

減毒活疫苗研發與生產

因胚胎細胞的低致瘤性與高安全性，FRhK-4 廣泛用于脊髓灰質炎減毒活疫苗的生產。在微載體培養體系中，脊髓灰質炎病毒滴度可達 6×10? PFU/mL，單批次 1000L 反應器可生產 500 萬劑口服疫苗，病毒滴度穩定性（批間差異＜8%）優于傳統猴腎細胞工藝。其無血清馴化株可降低外源因子污染風險，疫苗中宿主細胞 DNA 殘留量＜10pg / 劑，符合 WHO 生物制品標準。在工藝優化中，通過調控培養溫度（35℃）與血清濃度（2%），可使病毒收獲時間提前 8 小時，顯著提升生產效率。

抗病du藥物篩選與機制研究

該細胞系為多類病du藥物研發提供高效平臺。在抗脊髓灰質炎病du藥物篩選中，通過空斑減數實驗可精準測定藥物 EC??（如普來可那立 EC??=0.6μM），結果與動物實驗相關性達 0.89。在登革病du藥物測試中，其可區分 NS3 蛋白酶抑制劑與包膜蛋白抑制劑的作用差異，檢測靈敏度較 C6/36 細胞高 30%。基于其建立的 96 孔板高通量篩選體系，日均可檢測 400 種化合物，為廣譜抗病du藥物研發提供快速評估工具，尤其適用于同時靶向腸道與蟲媒病毒的候選藥物篩選。

三、培養方法

貼壁培養操作：

復蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉移至含 10mL 預熱培養基（MEM+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養，24 小時貼壁率超 90%。

換液：接種 48 小時后首ci換液，去除代謝廢物，此后每 2 天換液一次，維持細胞密度在 2×10?-8×10?個 /cm2（密度過高會降低病毒敏感性）。

傳代：融合度達 75% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細胞解離液，37℃孵育 1.5 分鐘，鏡檢細胞脫落后加 8mL 培養基終止，按 1:6 比例傳代，避免過度融合導致胚胎特性丟失。

病毒培養流程：

接種準備：將細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板，培養 24 小時至融合度 60%-70%，接種前用無血清培養基洗滌 2 次。

病毒感染：加入 100μL 系列稀釋的病毒液（如脊髓灰質炎病毒懸液），37℃吸附 1 小時，期間每 15 分鐘輕搖一次，吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。

觀察與收獲：脊髓灰質炎病毒感染后 48 小時觀察 CPE，登革病毒感染后 72 小時觀察，待 80% 細胞病變時收獲上清，-80℃凍存，通過空斑法或 RT-PCR 測定病毒滴度。

凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 6×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復蘇后傳代 2 次再用于病毒實驗（確保受體表達穩定）。

四、優勢與局限性

優勢：對脊髓灰質炎病毒、登革病毒敏感性ji高（滴度較普通猴腎細胞高 1-2 個數量級）；保留胚胎細胞特性，病毒復制效率高；遺傳背景穩定，實驗重復性好（CV＜7%）；符合 WHO 疫苗生產標準，安全性已通過長期驗證；可同時支持多種病毒復制，適用于廣譜研究。

局限性：對冠狀病毒等包膜病毒敏感性較低；長期傳代（＞100 次）可能出現胚胎標志物表達下調（約 15%）；貼壁依賴性強，懸浮培養難度高于 CHO 細胞；部分批次可能攜帶內源性逆轉錄病毒（需通過 PCR 篩選陰性株）。

五、研究意義

FRhK-4 細胞系的應用為*消滅脊髓灰質炎計劃提供了核心技術支撐，其高效分離能力使野毒株檢出靈敏度提升 50%，直接助力*脊髓灰質炎病例減少 99.9%（WHO 數據）。在基礎研究中，其揭示了胚胎腎細胞te有的病毒受體表達譜與病毒嗜性的關聯；在公共衛生領域，其支撐了數十億劑口服脊髓灰質炎疫苗的生產，同時為登革熱等熱帶傳染病的防控提供關鍵研究工具，是連接胚胎細胞生物學與病毒學應用的重要橋梁。

以上信息僅供參考，詳細信息請聯系我們。

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