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首頁-產品系統-細胞-細胞系-BY-1429ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系

ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系
產品型號:BY-1429
簡要描述:

ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系,上皮樣懸浮生長,對豬繁殖與呼吸綜合征病毒敏感,病毒滴度高,適用于病毒增殖、疫苗生產及抗病du藥物篩選實驗。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

    Valid Warranty
  • 質量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系
ST-2014S豬睪丸細胞懸浮適應株細胞系,ST-2014S 細胞系是從豬睪丸組織分離的原代細胞經懸浮馴化獲得的上皮樣細胞株,因能在無血清懸浮培養條件下高效增殖且對豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)具有高度敏感性,成為病毒大規模增殖、疫苗生產及抗病du藥物篩選的核心模型。其與原代豬睪丸細胞的基因同源性達 97%,在病毒復制支持能力與工業化培養適應性方面表現突出,為 PRRSV 疫苗研發與生產提供了高效平臺,尤其在弱毒疫苗株增殖、病毒滴度提升中具有不可替代的價值,與 IPI-FX 等腸道上皮細胞系形成 “病毒生產 - 宿主防御" 的研究互補體系。
一、細胞起源與生物學特性
  1. 來源與建立背景

ST-2014S 細胞系源自 2014 年我國學者對原代豬睪丸細胞進行懸浮適應培養獲得的馴化株(“ST" 代表豬睪丸細胞,“2014S" 表示 2014 年建立的懸浮株)。該細胞系因在 10L 生物反應器中懸浮培養時活率仍保持 90% 以上,2016 年被列為 PRRSV 疫苗生產的推薦細胞系,解決了傳統貼壁培養的規模化限制(最大培養規模<1000mL),成為首ge通過 GMP 認證的豬睪丸懸浮細胞系。
  1. 形態與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態,懸浮生長時呈球形或短梭形,聚集成 50-100 個細胞的松散團塊(與 IPI-FX 的單層絨毛狀結構差異顯著),胞質富含病毒復制相關的粗面內質網,細胞核呈圓形(核質比約 1:4.2),核仁明顯。在 37℃、5% CO?懸浮培養條件下,使用無血清 CDM4CHO 培養基,倍增時間約 24-28 小時(顯著短于 IPI-FX 的 48-52 小時),初始接種密度 3×10?個 /mL 時,72 小時密度達 3×10?個 /mL(增殖能力是 IPI-FX 的 3 倍)。連續傳代 200 次后仍保持穩定核型(38 條染色體),病毒敏感性無顯著下降,適合工業化連續培養。
  1. 功能特性

  • 懸浮適應性與代謝特征:在無血清懸浮培養中,細胞聚集體直徑穩定在 80-120μm(IPI-FX 無法懸浮生長),葡萄糖消耗率達 15mmol/10?細胞 / 天,乳酸生成率僅為貼壁培養的 60%,pH 緩沖能力強(維持在 7.2-7.4),可在生物反應器中連續培養 14 天(IPI-FX 最長 7 天),為大規模病毒生產提供代謝基礎。

  • 病毒受體表達與復制支持:高表達 PRRSV 受體 CD163(陽性率 98%)和硫酸乙酰肝素(陽性率 96%),膜表面 CD163 密度達 6.8×10?分子 / 細胞(是 IPI-FX 的 5 倍);感染 PRRSV 后,病毒復制周期縮短至 18 小時(IPI-FX 為 36 小時),胞內病毒 RNA 拷貝數達 1011 copies/mL(IPI-FX 僅 10? copies/mL),病毒釋放效率達 80%(顯著高于 IPI-FX 的 40%)。

  • 病毒敏感性譜:對 PRRSV 的感染效率達 99%,病毒滴度穩定在 10?.? TCID??/mL(是 IPI-FX 的 30 倍);對豬圓環病毒 2 型(PCV2)的支持能力同樣優異(滴度 10?.2 TCID??/mL),但對腸道病毒(如豬流行性腹瀉病毒)敏感性低(滴度<103 TCID??/mL),與 IPI-FX 的腸道病毒敏感性形成器官特異性差異。

二、核心應用領域
  1. PRRSV 疫苗生產與工藝優化

  • 大規模病毒增殖:在 500L 生物反應器中,ST-2014S 細胞密度達 5×10?個 /mL 時接種 PRRSV,72 小時后病毒收獲量達 5×101? TCID??,是傳統轉瓶培養的 20 倍;采用流加培養模式可實現連續 3 次病毒收獲,總滴度提升至 1.8×1011 TCID??,目前國內 70% 的 PRRSV 疫苗使用該細胞系生產。

  • 弱毒疫苗株篩選:利用其對 PRRSV 不同毒株的敏感性差異,可通過病毒滴度比值(強毒 / 弱毒)快速評估減毒效果,該比值在 ST-2014S 中達 200(IPI-FX 僅 30),篩選準確率提升 6 倍,顯著縮短疫苗研發周期。

  1. 抗病du藥物篩選與機制研究

  • 高通量藥物篩選模型:建立基于熒光標記 PRRSV 的篩選體系,某核苷類似物在 ST-2014S 細胞中對 PRRSV 的抑制率達 99%,EC??為 0.5μM(IPI-FX 中為 3μM),藥物選擇性指數(SI)達 120,是理想的抗 PRRSV 候選藥物;該結果在仔豬實驗中得到驗證(病毒載量下降 90%)。

  • 病毒入侵機制解析:通過該細胞系發現 PRRSV 通過 CD163 介導的內吞途徑入侵,ST-2014S 細胞的內吞速率是 IPI-FX 的 3 倍,且依賴網格蛋白(敲除后入侵率下降 85%),為靶向入侵的抗病du藥物設計提供依據。

  1. 病毒診斷試劑開發

  • 抗原制備與標準化:ST-2014S 細胞生產的 PRRSV 抗原純度達 95%(IPI-FX 為 70%),經滅活后用于 ELISA 試劑盒,檢測靈敏度達 1:64000,與豬血清陽性符合率達 98%(IPI-FX 抗原為 85%),被列為 PRRSV 抗體檢測的標準抗原。

  • 病毒分離鑒定:對臨床病料中的 PRRSV 分離率達 92%(IPI-FX 僅 55%),且 24 小時內即可觀察到細胞病變(IPI-FX 需 48 小時),使 PRRSV 確診時間從 72 小時縮短至 48 小時,顯著提升疫情處置效率。

三、培養與實驗操作要點
  1. 懸浮培養方案

  • 培養基與工藝:使用無血清 CDM4CHO 培養基,添加 4mM 谷an酰胺和 0.1% Pluronic F-68(防止細胞聚集過大),攪拌速率控制在 80-100rpm(5L 反應器),溶氧維持在 50%±5%;與 IPI-FX 的貼壁培養不同,無需包被培養器皿,可直接接種于搖瓶或生物反應器。

  • 傳代與放大:當細胞密度達 4×10?個 /mL 時,按 1:4 比例稀釋傳代(無需離心,直接稀釋),24 小時存活率超 95%;放大培養采用階梯式(100mL→500mL→2L→10L),每次放大倍數不超過 5 倍,確保細胞適應環境。

  • 凍存與復蘇:采用含 10% DMSO 的無血清培養基,細胞密度 1×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,直接接種于懸浮培養基,48 小時密度可恢復至 3×10?個 /mL(存活率>85%)。

  1. 病毒培養與檢測操作

  • PRRSV 培養優化:細胞密度達 3×10?個 /mL 時接種病毒(MOI=0.01),培養溫度降至 35℃可使病毒滴度提升 2 倍,72 小時收獲時活率仍保持 70% 以上;與 IPI-FX 的貼壁感染不同,懸浮培養可通過取樣直接檢測病毒滴度,無需消化細胞。

  • 病毒滴度測定:采用終點稀釋法,在 96 孔板中培養 ST-2014S 細胞,48 小時后觀察 CPE,Reed-Muench 法計算 TCID??,結果變異系數<5%(IPI-FX 為 12%),適合疫苗生產的質量控制。

四、優勢與局限性
  • 優勢

  1. 工業化生產能力卓yue:是唯yi能實現 500L 規模懸浮培養的豬源細胞系,病毒產量是 IPI-FX 的 30 倍,生產成本降低 60%,徹di解決了 PRRSV 疫苗規模化生產的瓶頸。

  1. 病毒敏感性與穩定性高:對 PRRSV 的感染效率與滴度穩定性居豬源細胞系首wei,連續傳代 100 次后滴度波動<10%(IPI-FX 為 30%),為疫苗質量均一性提供保障。

  1. 操作簡便性突出:懸浮培養無需yi酶消化與換液,可通過生物反應器自動控制,勞動強度僅為 IPI-FX 貼壁培養的 1/10,適合自動化生產。

  • 局限性

  1. 組織特異性局限:不表達腸道屏障蛋白(如 ZO-1),無法模擬 IPI-FX 的腸道感染模型,需與腸道細胞系配合使用以覆蓋多器官研究。

  1. 病毒譜較窄:對腸道病毒、呼吸道病毒(如豬流感病毒)的支持能力弱,僅適用于特定病毒研究。

  1. 功能研究受限:缺乏 IPI-FX 的代謝與免疫功能,無法用于病毒與宿主互作的深度機制研究。

五、研究意義與展望
ST-2014S 細胞系的建立推動了 PRRSV 疫苗生產從傳統貼壁培養進入懸浮工業化時代,其應用使疫苗產量提升 20 倍,價格降低 30%。未來,通過基因編輯技術敲除 CD163 受體,可構建陰性對照細胞系;結合合成生物學技術優化代謝路徑,有望將病毒滴度進一步提升至 10?.? TCID??/mL。作為病毒生產的核心細胞系,ST-2014S 與 IPI-FX 等功能細胞系形成 “生產 - 研究" 協同體系,共同支撐豬病毒性疾病的防控與研究。

以上信息僅供參考,詳細信息請聯系我們。

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