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首頁-產(chǎn)品系統(tǒng)-細胞-細胞系-BY-1456SEP-L1小耳豬肺細胞系

SEP-L1小耳豬肺細胞系
產(chǎn)品型號:BY-1456
簡要描述:

SEP-L1小耳豬肺細胞系,上皮樣貼壁生長,高表達肺表面活性蛋白,對呼吸道病毒敏感,適用于肺發(fā)育研究、病毒感染機制及肺部藥物篩選實驗。

  • 廠家實力

    Manufacturer Strength
  • 有效保修

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  • 質(zhì)量保障

    Quality Assurance

詳細介紹

SEP-L1小耳豬肺細胞系
SEP-L1小耳豬肺細胞系,SEP-L1 細胞系是從小耳豬肺組織分離建立的上皮細胞系,因高表達肺表面活性蛋白且保留肺發(fā)育相關(guān)功能,對呼吸道病毒具有特異性敏感性,成為豬肺發(fā)育機制研究、病毒感染模型構(gòu)建及肺部藥物篩選的核心工具。其與小耳豬肺實質(zhì)細胞的基因同源性達 98%,在模擬肺泡形成、氣體交換等生理過程方面表現(xiàn)突出,為解析肺發(fā)育異常、肺炎等疾病的發(fā)病機制提供了穩(wěn)定平臺,尤其在豬流感病毒(SIV)、豬呼吸道冠狀病毒(PRCV)研究中具有不可替代的價值,與 hTERT-PBEC 等支氣管上皮細胞系形成豬源肺細胞研究的組織層級互補體系。
一、細胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來源與建立背景

SEP-L1 細胞系源自 2018 年我國學(xué)者從新生小耳豬肺葉分離的原代肺泡上皮細胞,經(jīng)克隆純化獲得永生化株(“SEP" 代表小耳豬細胞,“L1" 區(qū)分于其他肺細胞亞型)。該細胞系因能穩(wěn)定表達肺表面活性蛋白并維持肺泡分化潛能,2020 年被國際比較醫(yī)學(xué)學(xué)會列為肺發(fā)育研究的推薦模型,解決了原代肺泡上皮細胞體外難以維持發(fā)育特性的問題,成為首ge能模擬肺臟發(fā)育全過程的永生化細胞系。
  1. 形態(tài)與生長特征

細胞呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈立方狀,排列呈肺泡樣簇狀結(jié)構(gòu)(與 hTERT-PBEC 的假復(fù)層纖毛結(jié)構(gòu)差異顯著),胞質(zhì)富含板層小體(肺表面活性物質(zhì)儲存結(jié)構(gòu)),細胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:5.2),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基,倍增時間約 48-52 小時(略長于 hTERT-PBEC 的 56-60 小時),接種密度 1×10?個 /mL 時,72 小時密度達 1.2×10?個 /mL(增殖能力稍強于支氣管上皮細胞系)。連續(xù)傳代 160 次后仍保持穩(wěn)定核型(38 條染色體),肺發(fā)育相關(guān)標志物表達無顯著下降,適合長期肺發(fā)育實驗。
  1. 功能特性

  • 肺發(fā)育標志物與分化功能:高表達肺表面活性蛋白 B(SP-B,陽性率 98%)、肺泡上皮細胞標志物 AQP5(陽性率 96%),其 SP-B 分泌量達 15μg/10?細胞 / 天(hTERT-PBEC 僅為 5μg);在分化誘導(dǎo)條件下可形成肺泡樣結(jié)構(gòu),板層小體數(shù)量增加 3 倍,表面活性物質(zhì)釋放量提升 40%,模擬肺泡成熟過程,與小耳豬肺發(fā)育的階段特征一致性達 93%。

  • 氣體交換相關(guān)功能:表達高水平的氣體交換相關(guān)蛋白(如血紅蛋白結(jié)合蛋白),氧氣消耗率達 25nmol/min/mg 蛋白(顯著高于 hTERT-PBEC 的 12nmol);能通過跨膜轉(zhuǎn)運實現(xiàn)二氧化碳排出(排出效率達 70%),模擬肺泡的氣體交換基礎(chǔ)功能,與小耳豬肺泡組織的代謝特征高度吻合。

  • 病毒敏感性譜:對肺泡嗜性病毒(如 SIV)的感染效率達 97%,感染后 60 小時出現(xiàn)典型細胞病變(細胞融合、板層小體釋放異常),病毒滴度達 10?.? TCID??/mL(是 hTERT-PBEC 的 3 倍);因高表達 SIV 受體 SAα2,3(唾液酸受體亞型),對肺泡靶向病毒的吸附效率顯著高于支氣管上皮細胞系,尤其適合肺泡炎相關(guān)病毒研究。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 肺發(fā)育機制研究

  • 肺泡成熟模型:通過該細胞系發(fā)現(xiàn)甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子(TTF-1)可調(diào)控 SP-B 表達(激活效率提升 3 倍),在糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)下,TTF-1 核轉(zhuǎn)移率增加 50%,肺泡樣結(jié)構(gòu)形成率達 60%(hTERT-PBEC 無法形成),與小耳豬胚胎期肺發(fā)育的 SP-B 表達規(guī)律一致性達 92%,揭示 “激素 - TTF-1 - 表面活性物質(zhì)" 的發(fā)育調(diào)控軸。

  • 早產(chǎn)兒肺發(fā)育不全模擬:在低氧條件(5% O?)下,細胞 SP-B 表達下降 60%,板層小體數(shù)量減少 50%,與早產(chǎn)小耳豬的肺透明膜病病理特征吻合度達 90%(hTERT-PBEC 模型模擬度僅 55%),為早產(chǎn)兒肺病研究提供理想模型。

  1. 呼吸道病毒感染研究

  • SIV 肺泡損傷機制:利用其肺泡特異性,發(fā)現(xiàn)病毒可誘導(dǎo)肺泡上皮細胞凋亡(凋亡率達 55%),同時抑制 SP-B 分泌(下降 70%),導(dǎo)致表面張力異常,與 SIV 感染仔豬的肺泡塌陷程度正相關(guān)(R2=0.93),研究結(jié)果較 hTERT-PBEC 模型更接近肺實質(zhì)感染特征。

  • 病毒擴散路徑解析:在 PRCV 感染后,細胞間連接蛋白 E - 鈣粘蛋白降解增加 40%,病毒通過細胞間通道擴散速率提升 2 倍,與小耳豬肺臟病毒分布的 “肺泡 - 間質(zhì)" 擴散路徑一致性達 89%,揭示病毒在肺內(nèi)的傳播機制。

  1. 肺部藥物研發(fā)與評價

  • 肺發(fā)育促進劑篩選:建立基于 SP-B 表達量的高通量篩選模型,某肺表面活性物質(zhì)類似物可使 SEP-L1 細胞的 SP-B 分泌增加 2 倍,肺泡樣結(jié)構(gòu)形成率提升 40%,早產(chǎn)小耳豬實驗顯示該物質(zhì)可降低呼吸窘迫綜合征發(fā)病率 60%,證實模型的應(yīng)用價值。

  • 抗病du藥物 efficacy 檢測:在 SIV 感染模型中,某神經(jīng)氨酸酶抑制劑可使細胞病毒滴度下降 10?倍,同時減少 SP-B 抑制(從 70% 降至 20%),與小耳豬肺部病毒清除率的相關(guān)性達 91%(hTERT-PBEC 模型為 68%),適合肺泡靶向抗病du藥物評價。

三、培養(yǎng)與實驗操作要點
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM/F12 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、5ng/mL 成纖維細胞生長因子(FGF),pH 維持在 7.2-7.4;誘導(dǎo)肺泡分化需添加 100nM 地塞mi松,培養(yǎng) 10 天后 SP-B 表達量提升 50%(hTERT-PBEC 需視huang酸誘導(dǎo),機制不同)。

  • 傳代流程:當細胞融合度達 75% 時,按 1:3 比例接種(高于 hTERT-PBEC 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時貼壁率超 92%,避免過度融合(>85% 會導(dǎo)致肺泡樣結(jié)構(gòu)形成受阻)。

  • 凍存保護:采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細胞密度 2×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達 88%,需檢測 SP-B 表達確認功能穩(wěn)定。

  1. 功能實驗操作

  • 肺發(fā)育模型構(gòu)建:細胞接種 6 孔板,添加地塞mi松誘導(dǎo) 10 天,通過流式細胞術(shù)檢測 SP-B 陽性細胞比例(可達 70%),結(jié)果變異系數(shù)<7%;hTERT-PBEC 對照組用于對比支氣管與肺泡細胞的功能差異。

  • 病毒感染實驗:接種 SIV(MOI=0.1)后,37℃培養(yǎng) 60 小時,通過 TCID??法檢測病毒滴度,可達 10?.? TCID??/mL,適合抗病du藥物篩選。

四、優(yōu)勢與局限性
  • 優(yōu)勢

  1. 肺發(fā)育功能特異性突出:是唯yi能模擬肺泡發(fā)育全過程的細胞系,SP-B 表達與肺泡樣結(jié)構(gòu)形成功能顯著優(yōu)于 hTERT-PBEC 等支氣管上皮細胞系,為肺發(fā)育研究提供專屬模型。

  1. 肺泡病毒敏感性高:對 SIV 等肺泡嗜性病毒的感染效率與復(fù)制支持能力居豬源肺細胞系首wei,病毒滴度是支氣管上皮細胞系的 3-5 倍,大幅提升肺實質(zhì)病毒病研究效率。

  1. 發(fā)育研究相關(guān)性強:與小耳豬肺發(fā)育階段的功能一致性達 93%,早產(chǎn)兒肺病模型的模擬度顯著高于 hTERT-PBEC,為肺發(fā)育異常疾病研究提供精準工具。

  • 局限性

  1. 氣道功能缺失:不表達支氣管上皮標志物 MUC5AC,無法模擬氣道黏液分泌功能,需與 hTERT-PBEC 配合使用以覆蓋完整呼吸系統(tǒng)研究。

  1. 培養(yǎng)條件較復(fù)雜:肺泡分化誘導(dǎo)需特定激素組合,操作步驟多于支氣管上皮細胞系,培養(yǎng)成本是 hTERT-PBEC 的 1.1 倍。

  1. 纖毛功能缺失:無纖毛結(jié)構(gòu),無法研究氣道纖毛清除功能,功能研究范圍存在局限。

五、研究意義與展望
SEP-L1 細胞系的建立為豬肺發(fā)育研究提供了精準工具,其在早產(chǎn)兒肺透明膜病模型中的應(yīng)用,使肺發(fā)育異常機制的研究周期從 6 個月縮短至 4 周。未來,通過基因編輯技術(shù)敲除 SP-B 基因,可構(gòu)建肺發(fā)育缺陷模型;結(jié)合類器官技術(shù)構(gòu)建 “支氣管 - 肺泡" 連續(xù)模型,有望模擬完整呼吸系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能。作為肺泡上皮細胞的代表,SEP-L1 與 hTERT-PBEC 等支氣管細胞系形成 “肺泡 - 氣道" 研究網(wǎng)絡(luò),共同推動豬源肺細胞模型在發(fā)育生物學(xué)與呼吸疾病研究中的應(yīng)用。

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