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TECHNICAL ARTICLES詳細介紹
來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
標志物表達譜:高表達桑椹胚階段特異性標志物,如 Sox2(陽性率 99%)、Utf1(陽性率 97%),同時表達 Oct4 和 Nanog(陽性率均>98%);與 MM-E1 相比,SSEA-1 表達量提升 3 倍,TRA-1-60 表達量略低(85%),體現更早階段的胚胎干細胞特征。
分化潛能:三胚層分化能力呈現偏倚性 —— 中胚層分化效率達 90%(顯著高于 MM-E1 的 80%),可高效生成造血干祖細胞(CD34?細胞比例 35%);內胚層分化效率 85%,外胚層分化效率 75%;體內畸胎瘤形成速度更快(6-8 周),中胚層衍生組織(肌肉、軟骨)占比達 50%,證實其中胚層分化優勢。
表觀遺傳特征:基因組整體甲基化水平 65%,低于 MM-E1 的 70%,多能性基因啟動子區域甲基化程度更低,尤其是中胚層分化相關基因(如 Tbx6)啟動子呈低甲基化狀態,為其高效中胚層分化提供表觀遺傳基礎。
早期胚胎發育機制研究
桑椹胚 - 囊胚轉化解析:通過單細胞 RNA 測序發現,MM-E2 細胞中存在 5% 的 “過渡態" 細胞,同時表達桑椹胚標志物(Sox2)與囊胚標志物(Gata6),Wnt 信號通路激活可促進其向囊胚細胞轉化(比例提升至 20%),揭示了胚胎致密化過程的分子開關。
細胞命運決定研究:利用其早期特性模擬 8 細胞期卵裂球分化,證實 Hippo 信號通路的區域差異調控內細胞團與滋養層的形成,抑制 Hippo 下游分子 YAP 可使滋養層細胞比例下降 40%,為理解胚胎極性建立提供直接證據。
再生醫學與細胞治療
造血細胞替代治療:定向分化為造血干祖細胞時,可在 4 周內生成功能性紅細胞和血小板,紅細胞攜氧能力達正常水平的 80%,血小板聚集功能正常,移植到免疫缺陷猴體內可短期重建造血功能(持續 8 周),為血液病治療提供種子細胞。
心血管疾病模型:高效分化的心肌細胞純度達 85%,自主搏動頻率 70-90 次 / 分鐘,對腎上腺素刺激反應靈敏(頻率提升 30%),可用于構建擴張型心肌病模型(通過突變 TTN 基因),模擬人類心肌纖維化過程。
藥物研發與安全性評價
中胚層毒性篩選:針對心血管、造血系統藥物的發育毒性評價,通過檢測藥物對 MM-E2 中胚層分化的影響,建立更精準的風險評估模型。例如,hua療藥物阿mei素在 0.1μM 濃度下即可使造血干祖細胞比例下降 50%,與臨床骨髓抑制效應高度一致,預測準確率 90%。
干細胞藥物優化:評估間充質干細胞外泌體對造血分化的促進作用,發現特定劑量外泌體可使 CD34?細胞比例提升至 50%,為優化干細胞擴增方案提供依據。
基礎培養方案
培養基:N2B27 培養基添加 15% KnockOut 血清替代物、10ng/mL bFGF、20ng/mL Activin A、5μM CHIR99021(GSK3 抑制劑),pH 7.2-7.4,每日添加 10ng/mL LIF 維持多能性。
傳代流程:集落直徑達 150-200μm 時,用 Accutase 酶消化 3 分鐘,制成單細胞懸液,按 1:7 比例接種至預涂 Vitronectin 的培養皿,24 小時后存活率>90%。
凍存保護:采用無血清凍存液(含 5% DMSO、60% KnockOut 血清替代物),細胞密度 8×10?個 /mL,程序降溫后液氮保存,復蘇時直接接種,無需離心洗滌。
分化誘導與功能實驗
中胚層定向分化:擬胚體階段添加 BMP4(20ng/mL)+ VEGF(50ng/mL),5 天后 CD34?細胞比例達 35%,繼續培養 10 天可獲得成熟造血細胞。
嵌合體形成實驗:將 GFP 標記的 MM-E2 細胞注射到獼猴早期胚胎,可在囊胚內細胞團中檢測到 GFP?細胞(嵌合率 30%),證實其體內發育潛能。
優勢:
早期胚胎特征:源自桑椹胚階段,可研究更早的細胞命運決定事件,補充了囊胚來源細胞系的研究空白。
分化偏倚性:中胚層分化效率高且均一性好,尤其適合造血、心血管等中胚層衍生組織的研究與應用。
培養穩定性:單細胞傳代存活率達 85%(顯著高于 MM-E1 的 60%),便于基因編輯與克隆篩選。
局限性:
外胚層分化受限:神經細胞分化效率低于 MM-E1,限制其在神經系統疾病研究中的應用。
培養基依賴性強:對 Activin A 高度依賴,去除后 24 小時即出現分化跡象,增加培養成本。
倫理爭議仍存:桑椹胚來源的細胞系仍涉及早期胚胎利用,部分地區監管政策嚴格。
MM-E2 細胞系的建立為靈長類早期胚胎發育研究提供了du特模型,其在桑椹胚 - 囊胚轉化機制中的發現,更新了對胚胎致密化過程的認知;在造血細胞再生中的應用,推動了血液病細胞治療的臨床前研究。未來,通過表觀遺傳修飾調控其分化偏倚性,可拓展至外胚層與內胚層研究;結合時空分辨測序技術,有望揭示胚胎細胞譜系建立的動態網絡,為再生醫學與發育生物學領域的突破提供核心工具。
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