多能性標(biāo)志物表達(dá)：高表達(dá)胚胎干細(xì)胞核心標(biāo)志物，如 Oct4、Nanog、Sox2，免疫熒光陽(yáng)性率＞99%；同時(shí)表達(dá)階段特異性胚胎抗原 4（SSEA-4）和腫瘤排斥抗原 1-60（TRA-1-60），流式檢測(cè)陽(yáng)性率均＞95%，與人類(lèi)胚胎干細(xì)胞的標(biāo)志物譜高度一致。

分化潛能：在體外可自發(fā)分化為三胚層細(xì)胞 —— 向中胚層分化時(shí)表達(dá) Brachyury（中胚層標(biāo)志物），向內(nèi)胚層分化時(shí)表達(dá) Sox17，向外胚層分化時(shí)表達(dá) Nestin，分化效率達(dá) 80% 以上；在體內(nèi)可形成畸胎瘤，包含骨、神經(jīng)、腸道上皮等多種組織類(lèi)型，證實(shí)其全能性。

表觀遺傳穩(wěn)定性：基因組甲基化水平與人類(lèi)胚胎干細(xì)胞接近（約 70%），關(guān)鍵多能性基因啟動(dòng)子區(qū)域呈低甲基化狀態(tài)，保證了基因表達(dá)的時(shí)空特異性，為研究胚胎發(fā)育的表觀遺傳調(diào)控提供模型。

早期細(xì)胞命運(yùn)決定：利用 MM-E1 細(xì)胞模擬囊胚期細(xì)胞分化，通過(guò)單細(xì)胞測(cè)序發(fā)現(xiàn)，第 5 代細(xì)胞中存在 2% 的原始內(nèi)胚層前體細(xì)胞（表達(dá) Gata6），其分化受 Notch 信號(hào)通路調(diào)控，抑制 Notch 后原始內(nèi)胚層細(xì)胞比例下降 60%，揭示了早期細(xì)胞譜系建立的分子機(jī)制。

器官發(fā)生模擬：通過(guò)分步誘導(dǎo)可形成具有結(jié)構(gòu)特征的類(lèi)器官，如神經(jīng)類(lèi)器官表達(dá)成熟神經(jīng)元標(biāo)志物 Map2，視網(wǎng)膜類(lèi)器官形成視杯結(jié)構(gòu)，為研究人類(lèi)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的疾病（如小頭畸形）提供模型，已成功模擬 Zika 病毒對(duì)神經(jīng)前體細(xì)胞的損傷過(guò)程。

細(xì)胞替代治療：定向分化為心肌細(xì)胞時(shí)，可形成節(jié)律收縮的心肌細(xì)胞團(tuán)，表達(dá)肌鈣蛋白 T，跳動(dòng)頻率達(dá) 60-80 次 / 分鐘，移植到心肌梗死模型猴體內(nèi)后，可改善心功能（射血分?jǐn)?shù)提升 15%），為心肌再生治療提供種子細(xì)胞。

疾病模型構(gòu)建：通過(guò) CRISPR-Cas9 技術(shù)引入亨廷頓舞蹈癥突變基因（HTT），建立神經(jīng)退行性疾病模型，分化的神經(jīng)元出現(xiàn)包涵體形成與凋亡增加，與人類(lèi)患者病理特征一致，用于篩選疾病修飾藥物。

發(fā)育毒性篩選：替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用于評(píng)估藥物的胚胎致畸性，通過(guò)檢測(cè)藥物對(duì) MM-E1 細(xì)胞三胚層分化的影響，建立致畸性評(píng)分體系。例如，沙利du胺處理后，中胚層分化效率下降 50%，內(nèi)胚層分化異常，與人類(lèi)胚胎的致畸效應(yīng)一致，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率達(dá) 88%。

干細(xì)胞毒性測(cè)試：評(píng)估細(xì)胞治療產(chǎn)品的安全性，如檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對(duì) MM-E1 細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)高濃度外泌體可導(dǎo)致多能性標(biāo)志物表達(dá)下降，為優(yōu)化細(xì)胞治療方案提供數(shù)據(jù)。

培養(yǎng)基：DMEM/F12 培養(yǎng)基添加 20% KnockOut 血清替代物、2mM 非必需氨基酸、0.1mM β- 巰基乙醇、10ng/mL bFGF，pH 維持在 7.2-7.4，每日添加 1000U/mL LIF 抑制分化。

傳代流程：當(dāng)集落直徑達(dá) 200-300μm 時(shí)，用 Dispase 酶消化 5 分鐘，機(jī)械吹打分離為小細(xì)胞團(tuán)，按 1:5 比例接種至預(yù)涂 Matrigel 的培養(yǎng)皿，24 小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基（存活率＞90%）。

凍存保護(hù)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用含 10% DMSO 的干細(xì)胞凍存液重懸至密度 5×10?個(gè) /mL，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO 后接種，48 小時(shí)后換液。

三胚層分化：將細(xì)胞接種至低吸附培養(yǎng)板，形成擬胚體后，中胚層誘導(dǎo)添加 BMP4（10ng/mL），內(nèi)胚層誘導(dǎo)添加 Activin A（100ng/mL），外胚層誘導(dǎo)添加 SB431542（10μM），7 天后檢測(cè)相應(yīng)標(biāo)志物。

畸胎瘤形成：將 1×10?個(gè)細(xì)胞注射到免疫缺陷鼠背部皮下，8-12 周后取材，HE 染色觀察三胚層組織形成。

優(yōu)勢(shì)：

局限性：