來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系源自 CHO-K1 細(xì)胞，通過(guò)乙基甲烷磺酸（EMS）化學(xué)誘變結(jié)合選擇性培養(yǎng)基篩選獲得。APRT 基因發(fā)生移碼突變導(dǎo)致蛋白功能wan全缺失，“APRT-20" 標(biāo)識(shí)其為第 20 株穩(wěn)定傳代的缺陷克隆。構(gòu)建過(guò)程未引入外源基因，僅通過(guò)自發(fā)突變與表型篩選獲得，確保代謝表型的天然性，避免基因編輯可能帶來(lái)的非特異性干擾。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)細(xì)胞輪廓清晰，較野生型 CHO 略小且排列緊密；因代謝缺陷，懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性較差，故主要以貼壁方式培養(yǎng)。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 36-42 小時(shí)，較野生型延長(zhǎng) 8-10 小時(shí)，需在培養(yǎng)基中補(bǔ)充腺嘌呤（50μg/mL）以維持正常增殖，傳代 60 次以上 APRT 缺陷表型穩(wěn)定，凍存復(fù)蘇后存活率超 82%。

功能特征：核心優(yōu)勢(shì)在于嘌呤代謝通路的特異性阻斷：APRT 缺失導(dǎo)致腺嘌呤無(wú)法轉(zhuǎn)化為 AMP，使腺嘌呤在細(xì)胞內(nèi)蓄積（濃度達(dá)野生型的 8-12 倍），并通過(guò)黃piao呤氧化酶轉(zhuǎn)化為高毒性的 2,8 - 二羥基腺嘌呤（2,8-DHA），在選擇性培養(yǎng)基（含腺嘌呤 + 次黃piao呤 + 氨蝶呤）中可與野生型細(xì)胞顯著區(qū)分（缺陷株因無(wú)法利用腺嘌呤而死亡）。同時(shí)，其補(bǔ)救合成通路缺陷使細(xì)胞對(duì)嘌呤類似物（如 6 - 巰基嘌呤）敏感性提升 3-5 倍，為藥物篩選提供du特表型。

貼壁培養(yǎng)操作：

選擇性篩選操作：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞（確保腺嘌呤充足），1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO+50μg/mL 腺嘌呤）重懸至 5×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上，復(fù)蘇后需立即補(bǔ)充腺嘌呤以恢復(fù)活力。

優(yōu)勢(shì)：APRT 缺陷表型穩(wěn)定，代謝特征重復(fù)性高（批間差異＜7%）；無(wú)需基因編輯工具，保留細(xì)胞天然遺傳背景；對(duì)嘌呤類似物敏感性高，藥物篩選效率較野生型提升 3 倍；可直接用于 APRT 功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證基因治療效果。

局限性：嚴(yán)格依賴腺嘌呤補(bǔ)充（缺省 24 小時(shí)即出現(xiàn)活力下降）；懸浮培養(yǎng)困難，大規(guī)模實(shí)驗(yàn)操作不便；長(zhǎng)期培養(yǎng)可能積累適應(yīng)性突變（約 10% 克隆出現(xiàn)部分代謝代償），需定期通過(guò)鑒別培養(yǎng)基篩選純化。