L6大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞系
L6大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞系作為源自大鼠骨骼肌組織的成肌細(xì)胞模型，因保留完整的肌分化潛能，在骨骼肌發(fā)育、肌損傷修復(fù)及肌病機(jī)制研究中應(yīng)用廣泛，成為探究成肌細(xì)胞增殖分化調(diào)控及肌肉相關(guān)疾病的重要實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠骨骼肌原代成肌細(xì)胞，經(jīng)永生化處理建立。細(xì)胞形態(tài)在增殖期呈長(zhǎng)梭形，兩端鈍圓，排列呈平行束狀，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)少量肌絲結(jié)構(gòu)；融合分化后形成多核肌管，肌管長(zhǎng)度可達(dá) 200μm 以上，約 30% 細(xì)胞融合成管。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，具有接觸抑制特性，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 94%。核心參數(shù)表現(xiàn)出成肌特征：倍增時(shí)間約 48 小時(shí)，處于增殖期的細(xì)胞活力旺盛；連續(xù)傳代 50 次后仍保持正常二倍體核型（染色體數(shù) 42 條）；成肌細(xì)胞標(biāo)志物肌動(dòng)蛋白（α-actin）、肌調(diào)節(jié)因子 MyoD 免疫熒光染色陽(yáng)性率達(dá) 95%；分化期肌球蛋白重鏈（MHC）表達(dá)量較增殖期升高 8.3 倍；無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體及病毒污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在肌分化機(jī)制研究中，L6 細(xì)胞在低血清誘導(dǎo)下，48 小時(shí)內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)融合，72 小時(shí)形成成熟肌管，分化率可達(dá) 70%，其中肌分化關(guān)鍵基因 Myogenin 表達(dá)量增加 6.2 倍，可模擬骨骼肌細(xì)胞從增殖到分化的完整過(guò)程，為解析肌分化的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供理想模型。肌損傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞在胰島素樣生長(zhǎng)因子 - 1（IGF-1）刺激下，增殖活性提升 45%，遷移能力增強(qiáng) 38%，肌管再生速度加快 2 倍，能很好地模擬體內(nèi)肌衛(wèi)星細(xì)胞修復(fù)損傷的過(guò)程，助力肌損傷修復(fù)機(jī)制的探究。藥物篩選領(lǐng)域，該細(xì)胞對(duì)肌營(yíng)養(yǎng)藥物反應(yīng)敏感，經(jīng)肌酸處理后，細(xì)胞內(nèi) ATP 含量增加 35%，肌管直徑增粗 20%，適用于評(píng)估肌營(yíng)養(yǎng)藥物及肌病治療藥物的療效。此外，將該細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)，可構(gòu)建體外肌損傷炎癥模型，用于研究炎癥微環(huán)境對(duì)肌修復(fù)的影響。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：增殖期推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱。誘導(dǎo)分化時(shí)采用含 2% 馬血清的 DMEM 培養(yǎng)基，更換頻率為每 24 小時(shí)一次，誘導(dǎo)周期約 5-7 天。傳代時(shí)采用含 0.25% 胰dan白酶的消化液處理，37℃孵育 3-5 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，傳代比例為 1:3-1:4，每 3-4 天傳代一次，維持細(xì)胞融合度在 60%-70% 以保持增殖活性。凍存液配方為基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇細(xì)胞存活率達(dá) 91% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常增殖分化能力。運(yùn)輸采用 T-25 培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，防止細(xì)胞脫落。
L6 大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞系以其穩(wěn)定的增殖分化能力、明確的成肌標(biāo)志物表達(dá)及易于培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)，在骨骼肌生物學(xué)研究與相關(guān)疾病藥物開(kāi)發(fā)中發(fā)揮著重要作用，為揭示肌肉發(fā)育規(guī)律和開(kāi)發(fā)肌病治療策略提供了可靠的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
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