來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 BHK-21 倉(cāng)鼠胚腎細(xì)胞為親本，通過(guò)兩步轉(zhuǎn)染法構(gòu)建：先導(dǎo)入含 T7 RNA 聚合酶基因的表達(dá)載體（含新mei素抗性基因），篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)株；再轉(zhuǎn)入 Tet0n 系統(tǒng)元件（含四環(huán)素應(yīng)答啟動(dòng)子 TRE 與嘌呤霉素抗性基因），經(jīng)雙重抗性篩選獲得最終細(xì)胞系。“T7 pol/p/N" 標(biāo)識(shí)其含 T7 聚合酶（T7 pol）及雙抗性篩選標(biāo)記（p 嘌呤霉素、N 新mei素），“Tet0n" 明確其誘導(dǎo)表達(dá)特性。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型成纖維樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，排列疏松，邊界清晰，核質(zhì)比適中。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-30 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 50 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率，T7 聚合酶表達(dá)及誘導(dǎo)系統(tǒng)活性無(wú)明顯衰減，凍存復(fù)蘇后存活率達(dá) 85% 以上。

表達(dá)特征：該細(xì)胞系的核心功能在于基因表達(dá)調(diào)控：基礎(chǔ)狀態(tài)下（無(wú)誘導(dǎo)劑），Tet0n 系統(tǒng)處于沉默狀態(tài)，外源基因表達(dá)量＜基礎(chǔ)值的 1%；加入四環(huán)素類似物（如多xi環(huán)素，1μg/mL）后，TRE 啟動(dòng)子被激活，T7 聚合酶介導(dǎo)外源基因（含 T7 啟動(dòng)子）高效轉(zhuǎn)錄，表達(dá)量可提升 100-1000 倍（通過(guò)熒光蛋白報(bào)告基因驗(yàn)證），且誘導(dǎo)反應(yīng)迅速（2-4 小時(shí)達(dá)峰值），撤去誘導(dǎo)劑后 24 小時(shí)內(nèi)表達(dá)量降至基礎(chǔ)水平，調(diào)控動(dòng)態(tài)范圍顯著優(yōu)于普通誘導(dǎo)系統(tǒng)。

優(yōu)勢(shì)：誘導(dǎo)效率高且調(diào)控范圍廣，可實(shí)現(xiàn)外源基因從 “沉默" 到 “高表達(dá)" 的精準(zhǔn)切換；T7 聚合酶與 T7 啟動(dòng)子的特異性結(jié)合，避免內(nèi)源性 RNA 聚合酶干擾，表達(dá)特異性強(qiáng)；兼容多種外源基因載體，適用范圍覆蓋病毒基因組、全長(zhǎng) cDNA 及小片段基因；培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，貼壁牢固，操作便捷，適合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)操作。

局限性：高濃度誘導(dǎo)劑（＞2μg/mL）可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生輕微毒性（增殖速率下降 10%-15%），需優(yōu)化誘導(dǎo)濃度；部分外源基因的高表達(dá)可能導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)（如未折疊蛋白反應(yīng)），需結(jié)合壓力應(yīng)答抑制劑使用；作為倉(cāng)鼠細(xì)胞，翻譯后修飾（如糖基化）與人類細(xì)胞存在差異，重組蛋白功能研究需結(jié)合人源細(xì)胞驗(yàn)證。

培養(yǎng)條件：常規(guī)使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 400μg/mL G418 與 2μg/mL 嘌呤霉素維持雙抗性篩選，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)良好。傳代時(shí)控制融合度在 70%-80%，采用溫和方法分離細(xì)胞，避免過(guò)度處理影響細(xì)胞活性。誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)前需更換無(wú)四環(huán)素血清培養(yǎng)基，消除血清中誘導(dǎo)劑干擾。

質(zhì)控與安全：定期通過(guò) Western blot 檢測(cè) T7 聚合酶表達(dá)，熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證誘導(dǎo)效率（確保誘導(dǎo)倍數(shù)＞100 倍）；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測(cè)需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，液氮保存可維持活性 5 年以上，復(fù)蘇后傳代 2 次待狀態(tài)穩(wěn)定后用于實(shí)驗(yàn)，涉及病毒操作時(shí)需符合相應(yīng)生物安全等級(jí)要求。