抗體分泌與特異性：穩定分泌 IgG1 型單克隆抗體，分泌量達 35μg/10?細胞 / 天（SEP-L1 無抗體分泌功能）；通過 Western blot 驗證，僅與豬 IRAV 蛋白（45kDa）特異性結合，與其他豬源炎癥因子（如 IL-1β、TLR4）無交叉反應（交叉反應率＜0.5%），與豬 IRAV 重組蛋白的免疫熒光共定位率達 98%，特異性顯著優于多克隆抗體。

抗原識別表位：識別豬 IRAV 蛋白的 N 端保守序列（第 28-42 位氨基酸），該表位在豬屬動物中保守性達 97%，但與鼠源 IRAV 的交叉反應率僅 5%，具有嚴格的種屬特異性；通過肽掃描實驗證實，該表位為 IRAV 與 IL-1 受體結合的關鍵區域，提示 5A8 抗體可競爭性抑制 IRAV 的信號傳導功能。

免疫學活性：在 ELISA 檢測中，抗體效價達 1:128000（檢測下限 0.1ng/mL），較市售多克隆抗體靈敏度提升 10 倍；在中和實驗中，50μg/mL 的 5A8 抗體可抑制 70% 的 IRAV 介導的 NF-κB 激活（SEP-L1 細胞模型中驗證），具備明確的功能阻斷活性，為研究 IRAV 的生理作用提供干預工具。

炎癥信號通路解析：利用 5A8 抗體阻斷 SEP-L1 細胞的 IRAV 功能，發現 LPS 誘導的 IL-6 分泌量下降 55%，TNF-α 表達減少 48%，證實 IRAV 在豬肺泡上皮細胞炎癥反應中的正向調控作用（R2=0.91），與豬肺炎模型的炎癥程度變化規律一致，揭示 “IRAV-NF-κB - 促炎因子" 的信號軸。

細胞定位與動態變化：通過 5A8 抗體的免疫熒光標記，首ci發現豬 IRAV 在正常肺組織中主要定位于肺泡巨噬細胞，而在 SIV 感染的 SEP-L1 細胞中，IRAV 向細胞核轉移率增加 60%，與炎癥激活狀態正相關，為 IRAV 的功能轉換機制提供可視化證據。

ELISA 檢測試劑盒：以 5A8 抗體為核心構建雙抗夾心 ELISA 體系，檢測豬血清 IRAV 濃度的線性范圍達 1-100ng/mL，批內變異系數＜5%，與豬敗血癥的臨床診斷符合率達 92%（SEP-L1 細胞培養上清驗證），較傳統方法檢測時間縮短至 2 小時，被列為豬炎癥性疾病的shou選檢測工具。

免疫組化診斷：在豬肺炎病理切片中，5A8 抗體可特異性標記 IRAV 陽性細胞，陽性率與肺損傷評分的相關性達 0.89（SEP-L1 細胞爬片對照），能精準區分炎癥分期，為臨床治療方案制定提供依據。

高通量藥物篩選模型：建立基于 5A8 抗體檢測的 IRAV 表達抑制篩選體系，某天然產物可使 LPS 刺激的 SEP-L1 細胞中 IRAV 表達下降 60%，該結果通過 Western blot（5A8 抗體檢測）與 RT-PCR 雙重驗證，與豬敗血癥模型的抗炎效果一致性達 88%，篩選效率較傳統動物實驗提升 5 倍。

藥物作用機制驗證：在新型抗炎藥物研究中，5A8 抗體被用于驗證 IRAV 是否為藥物靶點 —— 通過比較藥物處理組與 5A8 阻斷組的炎癥因子水平，證實該藥物可通過下調 IRAV 表達發揮作用（兩者抑制效果重疊率達 85%），為藥物作用機制提供明確證據。

培養基：RPMI-1640 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸，pH 維持在 7.2-7.4；為提高抗體產量，可添加 5ng/mL IL-6，使分泌量提升 20%（SEP-L1 培養無需此添加物）。

傳代流程：當細胞密度達 1×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代（高于 SEP-L1 的 1:3 比例），無需離心（直接稀釋），24 小時存活率超 95%，操作簡便性優于貼壁細胞系。

凍存保護：采用含 15% DMSO 的wan全培養基，細胞密度 5×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮，復蘇時 37℃水浴 1 分鐘，存活率可達 90%，需通過 ELISA 檢測抗體效價確認功能穩定。

抗體純化：采用 Protein G 親和層析柱純化，純度可達 98% 以上，內毒素含量＜0.1EU/mg，適合體內實驗；純化后的抗體在 4℃保存 6 個月或 - 20℃保存 2 年，活性保持率＞90%。

功能驗證實驗：在 SEP-L1 細胞中，用 5A8 抗體（20μg/mL）預處理 1 小時，再加入 LPS 刺激，通過 Western blot 檢測 p65 磷酸化水平（NF-κB 激活指標），抑制率應≥60%，以此驗證抗體活性。

優勢：

局限性：